Abordajes para la clonación de los productos de secreción del adulto de Taenia solium TSES33 y TSES38. Estudio preliminar de la antigenicidad de las moléculas recombinantes
Document title: Abordajes para la clonación de los productos de secreción del adulto de Taenia solium TSES33 y TSES38. Estudio preliminar de la antigenicidad de las moléculas recombinantes
Journal: Salus
Database: PERIÓDICA
System number: 000342946
ISSN: 1316-7138
Authors: 1
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Institutions: 1Instituto de Salud Carlos III, Centro Nacional de Microbiología, Madrid. España
2Universidad de Carabobo, Facultad de Ciencias de la Salud, Maracay, Aragua. Venezuela
3Instituto Gulbenkian de Ciencia, Oeiras. Portugal
Year:
Volumen: 12
Pages: 99-105
Country: Venezuela
Language: Español
Document type: Artículo
Approach: Experimental
Spanish abstract Las moléculas TSES33 y TSES38 son antígenos de secreción producidos por los adultos de Taenia solium, descritos previamente por su interés en el diagnóstico específico de teniosis intestinal. En el presente trabajo se diseñaron dos estrategias para su clonación, transcripción reversa del ARN a ADNc acoplado a amplificación posterior (RT-PCR) y síntesis de ADNc quimérico. En el caso de TSES38, la aproximación de RT-PCR permitió su obtención a partir del diseño de cebadores (primers) específicos y empleo de ARNms de cuello/escolex y proglótides maduras-grávidas del adulto de T. solium. Para la clonación de TSES33, fue necesaria la preparación de una molécula quimérica, sintetizando en primer lugar fragmentos truncados solapantes de la molécula mediante PCR que finalmente fueron ligados. Tras la obtención de los correspondientes ADNcs completos, éstos fueros subclonados en vectores de expresión, pGEX-4T, para la inducción de la expresión de las proteínas recombinantes en el sistema procariota. Los productos recombinantes obtenidos resultaron ser insolubles y, si bien fueron ensayados en “Western blot”, no fueron reconocidos por los sueros de pacientes portadores de Taenia saginata, por los sueros de individuos sanos ni por los sueros de animales inmunizados con moléculas de secreción de metacestodos de T. solium
English abstract TSES33 and TSES38 secreted antigens are molecules produced by Taenia solium adult described previously for its interest in the specific diagnosis of intestinal taeniosis. In this study two strategies were designed for cloning, reverse transcription of RNA to cDNA coupled to posterior amplification (RT-PCR) and synthesis of chimeric cDNA. In the case of TSES38, the RT-PCR approach enabled to obtain it by the design of specific primers and the use of mRNA from neck/scolex and gravid proglótides of T. solium mature-adult. For TSES33 cloning was necessary to prepare a chimeric molecule, synthesizing first overlapping truncated fragments of the molecule by PCR which were linked. After obtaining the corresponding complete cDNAs, these are subcloned in expression vectors, pGEX-4T to induce the expression of recombinant proteins in prokaryotic system. The recombinant products obtained were insoluble and, although they were tested in Western blot, were not recognized by sera from patients with Taenia saginata, by sera from healthy individuals or sera from immunized animals with the T. solium metacestodes secretion molecules
Disciplines: Medicina
Keyword: Diagnóstico,
Parasitología,
Taenia solium,
Clonación,
Antígenos,
Escherichia coli,
Teniasis,
Antigenicidad
Keyword: Medicine,
Diagnosis,
Parasitology,
Taenia solium,
Clonation,
Antigens,
Escherichia coli,
Taeniasis,
Antigenicity
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