Empleo de los agentes selectivos Geneticina G-418 e Higromicina B para la transformación genética en Phaseolus vulgaris variedad CIAP 72-47
Título del documento: Empleo de los agentes selectivos Geneticina G-418 e Higromicina B para la transformación genética en Phaseolus vulgaris variedad CIAP 72-47
Revista: Biotecnología vegetal
Base de datos: PERIÓDICA
Número de sistema: 000346502
ISSN: 1609-1841
Autores: 1
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Instituciones: 1Universidad Central "Marta Abreu" de Las Villas, Instituto de Biotecnología de las Plantas, Santa Clara, Villa Clara. Cuba
2Vrije Universiteit Brussel, Laboratory of Plant Genetics, Bruselas. Bélgica
Año:
Periodo: Oct-Dic
Volumen: 7
Número: 4
Paginación: 205-210
País: Cuba
Idioma: Español
Tipo de documento: Artículo
Enfoque: Experimental, analítico
Resumen en español Las leguminosas son una fuente de proteína muy importante en la dieta tanto humana como animal y de estas las del género Phaseolus son las más empleadas en la nutrición. La mayoría de los sistemas de transformación genética descritos hasta el momento requieren seleccionar las plantas que contengan el transgen introducido mediante un marcador de selección. La utilización de uno u otro, requiere que primero se determinen las concentraciones adecuadas de este y su efecto inhibitorio en el crecimiento de los explantes. Por lo tanto, el objetivo del presente trabajo fue determinar la concentración mínima inhibitoria de los antibióticos Geneticina G- 418 e Higromicina B que inhibieran el crecimiento de explantes de Phaseolus vulgaris var. CIAP 72-47. Como material vegetal se utilizaron segmentos de tallo de 5-6 mm de longitud que contenían el nudo cotiledonal y habían sido obtenidos a partir de semillas maduras. Para la selección se empleó el medio de cultivo de inducción de brotes al que se adicionaron diferentes concentraciones de Geneticina G-418 (0, 20, 30, 40, 50 y 60 mg.l -1 ) o Higromicina-B (0, 10, 15, 20 y 25 mg.l -1 ). Las evaluaciones se realizaron a las ocho semanas y se determinó el número de explantes con yemas múltiples regeneradas, así como el número de explantes necrosados. Se encontró que el antibiótico Geneticina G-418 inhibió totalmente el desarrollo de las yemas múltiples y el tejido se necrosó (100%) a partir de la concentración de 50 mg.l -1 . No se logró la regeneración de yemas en el segmento de tallo, y esto difirió estadísticamente del resto de los tratamientos, por lo que se seleccionó como la concentración mínima inhibitoria. Para el caso del antibiótico Higromicina-B, se logró la inhibición del desarrollo de las yemas múltiples a concentraciones por encima de 20 mg.l -1 , el explante se tornó necrótico y no fue posible la regeneración de yemas múltiples, por esta razón se seleccionó como la
Resumen en inglés Leguminous are a very important source of protein in the diet of human and animal. Phaseolus gender is the most used in the nutrition among them. Most of the systems for genetic transformation described up to the moment require selecting the plants that contain the transgen introduced by means of a selection marker. The selection of the system requires determining first their appropriate concentrations and inhibitory effect in the growth of the explants. Therefore, the objective of the present work was to determine the minimal inhibitory concentration of the antibiotics Geneticin G-418. Also the Hygromicin B that inhibited the growth of the explants of Phaseolus vulgaris var. CIAP 72-47. Stem segments of 5-6 mm with the cotyledonal nude obtained from mature seeds were used as plant material. Culture medium for buds induction with different concentrations of Geneticin G-418 (0, 20, 30, 40, 50 and 60 mg.l -1 ) and Hygromicin B (0, 10, 15, 20 and 25 mg.l -1 ) was used for the selection. Evaluations were carried out after eight weeks. Explants number with multiple buds, as well as number of necrotic explants were determined. Antibiotic Geneticin G-418 inhibited development of multiple buds. Explants were totally necrosed (100%) starting from concentration of 50 mg.l -1 . Formation of buds in the stem segment was not achieved.This differed statistically from the rest of treatments. According to results these one was selected as the minimal inhibitory concentration. Development of multiple buds was reached at a concentration superior to 20 mg.l -1 of antibiotic Hygromicin B. Explants turned necrosed and regeneration of multiple buds was not possible. That is why it was selected to be used in the experiments of genetic transformation of Phaseolus vulgaris variety CIAP 72-47 as minimal inhibitory concentration of this selective agent
Disciplinas: Biología,
Agrociencias
Palabras clave: Biología celular,
Leguminosas,
Biotecnología,
Frijol,
Phaseolus vulgaris,
Variedades,
Antibióticos,
Transformación genética,
Yemas,
Dosis
Keyword: Biology,
Agricultural sciences,
Cell biology,
Legumes,
Biotechnology,
Bean,
Phaseolus vulgaris,
Cultivars,
Antibodies,
Genetic transformation,
Buds,
Dose
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