| Journal: | Biotecnología aplicada |
| Database: | PERIÓDICA |
| System number: | 000266263 |
| ISSN: | 0864-4551 |
| Authors: | Silva, José A1 Carpio, Yamila Rodríguez, Elsa Estrada, Regla C Estrada, Mario P |
| Institutions: | 1Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, La Habana. Cuba |
| Year: | 2007 |
| Volumen: | 24 |
| Number: | 1 |
| Pages: | 49-52 |
| Country: | Cuba |
| Language: | Inglés |
| Document type: | Artículo |
| Approach: | Experimental, analítico |
| Spanish abstract | Los ARNs de interferencia pequeños pueden ser introducidos en las células y provocar el silenciamiento de determinados genes. Este fenómeno de ARN interferencia puede ser utilizado en la determinación de la función de los genes en la célula. Los ARNs de interferencia de pequeño tamaño se pueden obtener por vía química, utilizando sintetizadores comunes de ADN/ARN con una calidad adecuada para mediar el fenómeno de ARN interferencia. En este trabajo presentamos la obtención de estas moléculas en el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de Cuba y su evaluación en el silenciamiento de la proteína fluorescente verde en células de mamíferos. La expresión de eGFP fue visualizada a las 24 y 48 h después de la transfección en células HEK293 en un microscopio de fluorescencia. Se observó que el ARN doble cadena denominado B silenció la eGFP a las 48 h después de la transfección a una dosis de 120 nM. No se observó silenciamiento evidente de la expresión de la proteína con el ARN doble cadena denominado A Estos resultados fueron corroborados mediante análisis por Northem Blot |
| English abstract | Small interfering RNAs can be introduced into cells and cause silencing of specific genes. This can be used to study the effect of the gene on cellular function. The small interfering RNAs can be chemically prepared in an ordinary DNA/RNA synthesizer of a suitable quality for RNA interference. Here we report how these molecules are obtained at the Center for Genetic Engineering and Biotechnology (CIGB), Cuba, and their evaluation in the knowdown of green fluorescent protein in mammalian cells. In HEK293 cells, the eGFP expression was visualized at 24 and 48 h post-transfection under a fluorescence microscope. We observed that one RNA duplex (named RNA duplex B) silenced eGFP expression at 48 h post-transfection at a dose of 120 nM. No evident silencing effects were observed with the other RNA duplex (RNA duplex A). These results were corroborated by Northern blot analysis |
| Disciplines: | Biología |
| Keyword: | Genética, Biotecnología, Síntesis de ARN, Proteína fluorescente verde, Silenciamiento génico |
| Keyword: | Biology, Genetics, Green fluorescent protein (GFP), Gene silencing, RNA synthesis |
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