Cloning, expression and purification of the multiepitopic polypeptide TAB1-His for HIV 1 diagnosis



Document title: Cloning, expression and purification of the multiepitopic polypeptide TAB1-His for HIV 1 diagnosis
Journal: Biotecnología Aplicada
Database: PERIÓDICA
System number: 000437425
ISSN: 0864-4551
Authors: 2
2
2
2
1
2
2
2
Institutions: 1Centro de Inmunoensayo, Laboratorio de Retrovirus, La Habana. Cuba
2Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de Sancti Spíritus, Laboratorio de Biología Molecular, Sancti Spiritus. Cuba
Year:
Season: Ene-Mar
Volumen: 34
Number: 1
Country: Cuba
Language: Inglés
Document type: Artículo
Approach: Analítico, descriptivo
Spanish abstract El polipéptido multiepitópico TAB1, que representa regiones de la proteína gp120 del Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH), forma parte de los antígenos que componen el juego diagnóstico UMELISA® HIV 1+2 RECOMBINANT para la detección de anticuerpos anti-VIH. Este inmunodiagnóstico producido por el Centro de Inmunoensayo (CIE), es el que se utiliza en Cuba, tanto para la pesquisa de pacientes infectados con el VIH como para asegurar que toda la sangre que reciben los bancos esté libre del virus. Originalmente la proteína se expresaba en un vector bajo el promotor triptófano y su purificación se realizaba por HPLC de fase reversa, lo que encarecía el proceso y se obtenían bajos rendimientos. En este trabajo, con el empleo de nuevas técnicas de clonaje y purificación se realizó un rediseño del vector de expresión, que incluyó la modificación del gen para incorporarle una cola de histidinas a la proteína TAB1, lo que permitió purificarla por cromatografía de afinidad a iones metálicos inmovilizados. La modificación del sistema regulador del promotor triptófano por el ptrc ofreció un mejor control y niveles de expresión alrededor del 20 %. Con este nuevo proceso productivo se obtuvo una proteína TAB1-His con un grado de pureza y propiedades antigénicas que permiten utilizarla para la detección de anticuerpos anti-VIH y, por tanto, cumple con los requisitos exigidos para su empleo en el diagnosticador UMELISA® HIV 1+2 RECOMBINANT
English abstract The multi-epitope polypeptide TAB1 representing sequences of the gp120 HIV protein is one of the antigens included in the UMELISA® HIV 1+2 RECOMBINANT diagnostic kit to detect antibodies against HIV. This test is produced by the Immunoassay Center and it has been used in Cuba both for screening HIV infected patients and checking blood quality in blood Banks. Originally the protein was expressed in a vector with the tryptophan
Disciplines: Química,
Medicina
Keyword: Química farmacéutica,
Diagnóstico,
Polipéptidos multiepitópicos,
Proteína recombinante,
VIH,
Quelatos metálicos
Keyword: Medicinal chemistry,
Diagnosis,
Multiepitopic polypeptides,
Recombinant protein,
HIV,
Metal chelates
Full text: Texto completo (Ver HTML) Texto completo (Ver PDF)