Efecto de la densidad celular y la multiplicidad de infección sobre la producción de baculovirus recombinantes en cultivos de células de insecto
Título del documento: Efecto de la densidad celular y la multiplicidad de infección sobre la producción de baculovirus recombinantes en cultivos de células de insecto
Revue: Tip. Revista especializada en ciencias químico-biológicas
Base de datos: PERIÓDICA
Número de sistema: 000348156
ISSN: 1405-888X
Autores: 1
2
1
1
Instituciones: 1Universidad Nacional Autónoma de México, Instituto de Biotecnología, Cuernavaca, Morelos. México
2Instituto Tecnológico de Sonora, Ciudad Obregón, Sonora. México
Año:
Volumen: 13
Número: 2
Paginación: 65-72
País: México
Idioma: Español
Tipo de documento: Artículo
Enfoque: Experimental, analítico
Resumen en español El sistema células de insecto-baculovirus ha demostrado ser un sistema útil y versátil para la producción de proteínas recombinantes. Consiste en la infección de células de insecto con un baculovirus recombinante que contiene el gen de la proteína de interés. Una de las principales limitantes del sistema es obtener resguardos virales con alto contenido de partículas virales infecciosas (unidades formadoras de placa, ufp). En este trabajo se evaluó el efecto de la multiplicidad de infección (MDI) y la concentración celular al momento de la infección (CCI) en la amplificación de un baculovirus recombinante. Se evaluaron combinaciones de MDI de 0.1 y 1 ufp/ célula con CCI de 1 y 2 x10 6 cél/mL. Se siguieron las cinéticas de crecimiento de las células infectadas, la concentración de proteína total y de la proteína gp64 en el sobrenadante de los cultivos y los títulos virales al momento de la cosecha. Se encontró que una MDI de 0.1 ufp/cél y una concentración celular de 1x10 6 cél/mL resultaron en el mayor título viral, 3.8 ± 2 x10 8 ufp/mL. Los mayores títulos virales estuvieron acompañados por un menor crecimiento celular. Los resultados de este trabajo pueden ser utilizados para producir resguardos de baculovirus recombinantes con títulos virales altos y mejorar la eficiencia del proceso
Resumen en inglés The insect cell-baculovirus expression system is versatile and useful for the production of recombinant proteins. It consists in infecting insect cell cultures with a recombinant baculovirus that contains the gene of interest. An important limitation of the system is the limited availability of baculoviral stocks with high titers of infectious particles (plaque forming units, pfu). In this work, the effect of multiplicity of infection (MOI) and cell concentration at the time of infection (CCI) on the yield of baculovirus infectious particles was investigated. Combinations of two values for MOI (0.1 or 1 pfu/cell) and CCI (1 or 2 x10 6 cel/mL) were tested. Kinetics of cell growth, total protein and gp64 concentrations in the culture supernatant, and the baculovirus titer at the time of harvest were determined. The highest viral titers, 3.8 ± 2 x10 8 pfu/mL, were obtained in cultures infected at a MOI = 0.1 pfu/cell and a CCI = 1x10 6 cell/mL. Such cultures had the lowest cell growth after infection. The results obtained in this work can be used for the efficient production of baculovirus stocks with high viral titers
Disciplinas: Biología
Palabras clave: Biología celular,
Insectos,
Virus,
Infecciones,
Proteínas recombinantes,
Densidad celular,
Multiplicidad,
Baculovirus
Keyword: Biology,
Cell biology,
Insects,
Virus,
Recombinant proteins,
Cell density,
Multiplicity,
Baculovirus
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