| Revue: | Revista de investigaciones veterinarias del Perú |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000383803 |
| ISSN: | 1609-9117 |
| Autores: | Watanabe, Raquel1 Manchego, Alberto1 Rivera, Hermelinda1 |
| Instituciones: | 1Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Facultad de Medicina Veterinaria, Lima. Perú |
| Año: | 2014 |
| Volumen: | 25 |
| Número: | 3 |
| Paginación: | 419-429 |
| País: | Perú |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental |
| Resumen en español | El objetivo del presente estudio fue determinar, mediante la técnica de RT-PCR Tiem- po Real y cuantificación relativa según el método 2 - Ct , los niveles relativos de expre- sión in vitro de ARN mensajero de IL-2 e IL-10 en leucocitos circulantes de alpacas en presencia de antígenos clostridiales, empleándose como control endógeno a GAPDH. Se colectó sangre entera de 10 alpacas adultas. Las muestras fueron centrifugadas para obtener la fracción leucocitaria en gradiente de Ficoll, colectándose la capa flogística. Se hizo un pool de leucocitos que fueron purificados con cloruro de amonio. Se centrifugó y la concentración se ajustó a 500 000 células vivas/ml de medio mínimo esencial (MEM). Fueron cultivados en placas para cultivo celular de 24 pocillos y enfrentados a suspen- siones de extracto clostridial a las concentraciones de 400, 16, 0.8 y 0.2 μg/ml por 1, 12 y 24 h. Posteriormente, se realizó la RT-qPCR. La cinética de la expresión de IL-2 mostró una tendencia no significativa inversamente proporcional a la dosis de antígeno clostridial en los tres tiempos de incubación, a diferencia de IL-10 cuya expresión fue variable, alcan- zando el máximo a las 12 h de incubación (p<0.05) y mostrando un patrón similar al de IL- 2 en la dosis de 16 μg/ml de antígeno clostridial. La expresión de IL-10 superó hasta en 40 veces lo expresado por el calibrador respecto a IL-2, evidenciándose una marcada res- puesta hacia la polarización del subtipo Th2 |
| Resumen en inglés | The aim of the study was to determine the relative in vitro ARNm expression levels of IL-2 and IL-10 in peripheral blood leukocytes by real time RT-PCR and relative quantification using the 2 - Ct method in presence of clostridial antigens and GAPDH as an endogenous control. Whole blood was collected from 10 adult alpacas. Samples were centrifuged to obtain leukocytes using the Ficoll reagent, purified with ammonium chloride and cultured in 24-well plates at a concentration of 500 000 live cells/ml minimal essential medium (MEM) with clostridial extract suspensions at concentrations of 400, 16, 0.8 and 0.2 μg/ml. Subsequently, the RT-qPCR test was performed. IL-2 kinetic expression patterns were inversely proportional to the clostridial antigen dose in the three incubation times (p>0.05), unlike IL-10 which its kinetic expression patterns were variable, reaching its maximum at 12 h (p<0.05) while showing a similar trend like IL-2 in the 16 μg/ml clostridial antigen dose. IL-10 expression exceeded 40-fold the control expression respect to IL-2. A strong polarization towards the Th2 subtype was shown |
| Disciplinas: | Medicina veterinaria y zootecnia |
| Palabras clave: | Otras especies de interés zootécnico, Alpacas, Interleucinas, Clostridium perfringens, PCR |
| Keyword: | Veterinary medicine and animal husbandry, Species of commercial interest, Alpacas, Interleukins, Clostridium perfringens, PCR |
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