| Revue: | Ciencia e tecnologia de alimentos |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000294192 |
| ISSN: | 0101-2061 |
| Autores: | Silva, Maria Estela1 Pellogia, Cassia Piza, Francisco Assis Toledo Franco, Telma Teixeira |
| Instituciones: | 1Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica, Campinas, Sao Paulo. Brasil |
| Año: | 1997 |
| Periodo: | Sep-Dic |
| Volumen: | 17 |
| Número: | 3 |
| Paginación: | 219-223 |
| País: | Brasil |
| Idioma: | Inglés |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, analítico |
| Resumen en inglés | This work investigated the effect of the molecular weight of polyethyleneglycol (PEG) upon the partition coefficient of beta-galactosidases from three different microorganisms: Escherichia coli, Klueveromyces lactis and Aspergillus orizae. It was found that PEG 6,000 and PEG 8,000/phosphate were the best systems for achieving the highest purification factors of E. coli beta-galactosidase. However, the other two yeast beta-galactosidases were not efficiently separated from their contaminants in any of the PEG/salt systems. In order to improve the separation of Klueveromyces lactis beta-galactosidase from the main protein contaminants, the biospecific ligand p-aminophenyl 1-thio-beta-D-galactopyranoside (APGP) was attached to activated PEG 4000. The affinity PEG having APGP bound to its backbone was synthesized in two steps. The partitioning of Klueveromyces lactis beta-galactosidase in aqueous two-phase systems prepared with 6% APGP-PEG4000 + 12% dextran T505,000 increased 1.6-fold the purification factor of the target enzyme, allowing the recovery of 83% of the enzyme in the top PEG-rich phase |
| Resumen en portugués | Este trabalho tratou da investigação do efeito do peso molecular de polietilenoglicol (PEG) sobre a partição de enzimas beta-galactosidases de diferentes origens microbianas: Escherichia coli, Klueveromyces lactis e Aspergillus orizae em sistemas de duas fases aquosas (SDFA).Foi observado que os melhores sistemas para purificação da enzima de E. coli foram os formados por PEG 4000, 6000 e 8000/fosfato, fornecendo os mais elevados fatores de purificação da enzima. As enzimas de Klueveromyces lactis e Aspergillus orizae não foram eficientemente purificadas nestes sistemas sendo insensíveis à alterações do peso molecular do PEG. Portanto, um outro sistema de duas fases aquosas foi desenvolvido contendo um ligante específico, p-aminofenil 1-tio-beta-D-galactopiranosídeo (APGP), acoplado ao PEG para purificar a enzima de Klueveromyces lactis. Uma etapa simples de partição no SDFA formado por 6% APGP-PEG4000 + 12% dextrana T505.000 foi capaz de recuperar 83% da enzima na fase superior do sistema e de aumentar 1,6 vezes o fator de purificação |
| Disciplinas: | Química |
| Palabras clave: | Bioquímica, Microbiología, Sistema acuoso de dos fases, Beta galactosidasa, Proteínas, Escherichia coli, Klueveromyces lactis, Aspergillus orizae, Coeficiente de partición |
| Keyword: | Chemistry, Biochemistry, Microbiology, Beta-galactosidase, Proteins, Aqueous two-phase system, Partition coefficient, Escherichia coli, Klueveromyces lactis, Aspergillus orizae |
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