| Revue: | Anais da Academia Brasileira de Ciencias |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000357214 |
| ISSN: | 0001-3765 |
| Autores: | Queiroz, Sabrina R.A1 Silva, Andrea N.M.R1 Santos, Jefferson J.S1 Marques-Junior, Ernesto T.A1 Bertani, Giovani R2 Gil, Laura H.V.G1 |
| Instituciones: | 1Fundacao Oswaldo Cruz, Centro de Pesquisas Aggeu Magalhaes, Recife, Pernambuco. Brasil 2Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Bioquimica, Recife, Pernambuco. Brasil |
| Año: | 2013 |
| Periodo: | Mar |
| Volumen: | 85 |
| Número: | 1 |
| Paginación: | 159-168 |
| País: | Brasil |
| Idioma: | Inglés |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, aplicado |
| Resumen en inglés | RNA replicon derived from Flavivirus genome is a valuable tool for studying viral replication independent of virion assembly and maturation, besides being a great potencial for heterologous gene expression. In this study we described the construction of subgenomic replicons of yellow fever virus by yeast-based homologous recombination technique. The plasmid containing the yellow fever 17D strain replicon (pBSC-repYFV-17D), previously characterized, was handled to heterologous expression of the green fluorescent protein (repYFV-17D-GFP) and firefly luciferase (repYFV-17D-Luc) reporter genes. Both replicons were constructed by homologous recombination between the linearized vector pBSC-repYFV-17D and the PCR product containing homologous 25 nucleotides ends incorporated into PCR primers. The genomic organization of these constructs is similar to repYFV-17D, but with insertion of the reporter gene between the remaining 63 N-terminal nucleotides of the capsid protein and 72 C-terminal nucleotides of the E protein. The replicons repYFV-17D-GFP and repYFV-17D-Luc showed efficient replication and expression of the reporter genes. The yeast-based homologous recombination technique used in this study proved to be applicable for manipulation of the yellow fever virus genome in order to construct subgenomic replicons |
| Resumen en portugués | O replicon de RNA derivado do genoma de Flavivirus é uma ferramenta valiosa para o estudo de replicação viral independente da montagem e da maturação do virion, além de possuir um grande potencial para expressão de genes heterólogos. Neste estudo nós descrevemos a construção de replicons subgenômicos do vírus da febre amarela utilizando a técnica de recombinação homóloga em levedura. O plasmídeo contendo o replicon do vírus febre amarela cepa 17D (pBSC-repYFV-17D), caracterizado anteriormente, foi manipulado para a expressão heteróloga dos genes repórteres green fluorescent protein (repYFV-17D-GFP) e firelly luciferase (repYFV-17D-Luc). Ambos os replicons foram construídos por recombinação homóloga entre o vetor pBSC-repYFV-17D linearizado e o produto de PCR contendo 25 nucleotídeos terminais homólogos incorporados aos oligonucleotídeos iniciadores. A organização genômica dos construídos é semelhante ao repYFV-17D, com inserção de um gene repórter entre os restantes 63 nucleotídeos N-terminais da proteína do capsídeo e 72 nucleotídeos C-terminais da proteína E. Os replicons repYFV-17D-GFP e repYFV-17D-Luc mostraram uma eficiente replicação e expressão dos genes repórteres. A técnica de recombinação homóloga em levedura usada neste estudo demonstrou ser aplicável à manipulação do genoma do vírus da febre amarela para a construção de replicons subgenômicos |
| Disciplinas: | Biología |
| Palabras clave: | Genética, Virus, Fiebre amarilla, Clonación, Genes reporteros, Recombinación homóloga, Replicones |
| Keyword: | Biology, Genetics, Virus, Yellow fever, Cloning, Reporter genes, Homologous recombination, Replicons |
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