| Journal: | Revista fitotecnia mexicana |
| Database: | PERIÓDICA |
| System number: | 000427823 |
| ISSN: | 0187-7380 |
| Authors: | Donayre Torres, Alberto J1 Reynaga Peña, Cristina1 Gómez Lim, Miguel A1 |
| Institutions: | 1Instituto Politécnico Nacional, Centro de Investigación y de Estudios Avanzados, Irapuato, Guanajuato. México |
| Year: | 2008 |
| Season: | Oct-Dic |
| Volumen: | 31 |
| Number: | 4 |
| Pages: | 309-316 |
| Country: | México |
| Language: | Español |
| Document type: | Artículo |
| Approach: | Experimental |
| Spanish abstract | La secuencia nativa del gen gag del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) se expresó tanto en plantas transformadas de tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) como en E. coli. Dos versiones quiméricas del gen gag (gag-ENV y gag-RT) se expresaron independientemente. El análisis de la expresión permitió detectar el ARNm de las construcciones en tejidos de hoja y fruto de tomate. Sin embargo, no se pudo detectar la presencia de la proteína Gag completa, aun-que el anticuerpo sí detectó un dominio (p24) de Gag expresado en frutos de dos líneas transgénicas Gag-ENV. En la expresión del VIH en células de mamíferos, las secuencias nativas de genes tardíos como gag promueven la desestabilización de los mensajeros virales, que probablemente también se produzca en las células vegetales. Gag es capaz de formar partículas tipo virus (PTV) del VIH en sistemas de expresión heteróloga, como E. coli y levaduras. En este trabajo, las construcciones Gag-RT y Gag-ENV se expresaron en células de E. coli para confirmar si las proteínas quiméricas Gag-ENV y Gag-RT podían formar PTV. La expresión de estas construcciones rindieron niveles en E. coli de 2 mg L-1 para la proteína Gag-RT y de 4 mg L-1 para Gag-ENV, de proteína purificada. Micrografías electrónicas permitieron verificar la formación de PTV en el citoplasma de E. coli expresando la proteína Gag-ENV, lo cual indica que la fusión de los epítopos no interfirió con el ensamblaje de Gag en células bacterianas |
| English abstract | Native sequence of gag gene from human immunodeficienvy virus (HIV) was used to express in tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) plants and also in E. coli. Two versions of chimeric gag gene (gag-ENV y gag-RT) were expressed independently. According to the expression analysis the messenger RNA from chimeric versions of gag gene was detected in tomato leaves and fruit tissues. However, we did not detect expression of the whole Gag protein in tomato plants, although the antibody did detect the p24 capsid domain ex-pression in two transformed lines of Gag-ENV. During HIV expres-sion in mammalian cells the late genes such as gag promote instabil-ity of viral RNA messengers, and this could also be happening in plant tissues. Gag itself is able to originate viral-like particles (VLPs) of HIV when is expressed in heterologous systems, such as E. coliand yeast. In this report, Gag-RT and Gag-ENV constructs were expressed in E. coli to confirm if chimeric proteins Gag-RT and Gag-ENV are able to assembly into viral like particles. Expression of these constructs yielded moderate levels in E. coli (2 mg L-1 of Gag-RT and 4 mg L-1 of Gag-ENV) of purified chimeric proteins. Elec-tron microscopy studies showed the presence of viral-like particles in cytoplasm of E. coli cells expressing Gag-ENV protein, thus indicat-ing that addition of the epitopes did not interfere with proper as-sembly of Gag in bacterial cells |
| Disciplines: | Agrociencias, Medicina |
| Keyword: | Fitotecnia, Inmunología, Genética, Biotecnología, Biología celular, Expresión génica |
| Keyword: | Agricultural sciences, Medicine, Crop husbandry, Immunology, Genetics, Biotechnology, Cell biology, Gene expression |
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