| Journal: | Revista de la Sociedad Química de México |
| Database: | PERIÓDICA |
| System number: | 000221007 |
| ISSN: | 0583-7693 |
| Authors: | Yáñez, Jorge1 Soberón, Xavier Gaytán, Paul |
| Institutions: | 1Universidad Nacional Autónoma de México, Instituto de Biotecnología, Cuernavaca, Morelos. México |
| Year: | 2004 |
| Season: | Ene-Mar |
| Volumen: | 48 |
| Number: | 1 |
| Pages: | 26-37 |
| Country: | México |
| Language: | Español |
| Document type: | Artículo |
| Approach: | Experimental |
| Spanish abstract | Los Fmoc-trinucleósido-difosfato fosforamiditos (FTDFs)1 son moléculas compuestas por tres nucleósidos, teniendo aplicación como unidades mutagénicas durante el ensamble automatizado de oligonucleótidos. El uso de estos sintones permite sustituir codones silvestres por codones mutantes completos en una región determinada del gen de interés, evitando a nivel de proteína, el sesgo hacia sólo cierto tipo de aminoácidos que se genera con los métodos de mutagénesis basados en mutaciones puntuales de nucleótidos y también la redundancia de codones que se obtiene con la preparación de oligonucleótidos degenerados. En el presente trabajo se exploraron varias rutas sintéticas para su preparación, teniendo como principal objetivo lograr reacciones de acoplamiento internucleotídico limpias que faciliten los procesos de purificación cromatográficos, utilizando insumos de fácil preparación. Las síntesis se realizaron en fase líquida, en escalas de gramos, evaluando metodologías de fosfatotriéster. El mejor resultado se obtuvo usando 2-clorofenil-O,O-bis(1-hidroxibenzotriazolil)fosfato como reactivo fosforilante y tres reacciones sin aislar |
| English abstract | Fmoc-trinucleoside-diphosphate phosphoramidites are molecules assembled with three nucleosides, having application as mutagenic units during automated synthesis of oligonucleotides. These synthons afford substitution of wild-type codons by complete mutant codons in a specific region of the target gene, avoiding at the protein level, the bias toward certain kind of amino acids that is generated with conventional methods of mutagenesis. In the present work, three pathways of organic synthesis were explored for the preparation of such valuable compounds, setting as main goal the achievement of clean, one-pot internucleotidic reactions that enable the easy purification of the target compound by column chromatography. Syntheses were performed in liquid-phase and gram-scales through the phosphotriester method. The best pathway for the preparation of dinucleotides and trinucleotides made use of 2-chlorophenyl-O,O-bis(1-hydroxybenzotriazoly)phosphate as phosphorylating reagent |
| Disciplines: | Química |
| Keyword: | Química orgánica, Oligonucleótidos, Trinucleótidos, Mutagénesis, Enzimas, Codones |
| Keyword: | Chemistry, Organic chemistry, Oligonucleotides, Trinucleotides, Mutagenesis, Enzymes, Codons |
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