| Journal: | Revista de la Academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales |
| Database: | PERIÓDICA |
| System number: | 000359734 |
| ISSN: | 0370-3908 |
| Authors: | Sánchez-Gómez, Myriam1 Novoa Herrán, Sandra Susana |
| Institutions: | 1Universidad Nacional de Colombia, Departamento de Química, Bogotá. Colombia |
| Year: | 2011 |
| Season: | Jul-Sep |
| Volumen: | 35 |
| Number: | 136 |
| Pages: | 277-286 |
| Country: | Colombia |
| Language: | Español |
| Document type: | Artículo |
| Approach: | Experimental, aplicado |
| Spanish abstract | El método de fraccionamiento con detergentes descrito por Rambsy y Makowski en 1999, fue modificado utilizando un buffer con digitonina (0,015%) para permeabilizar células HTR8/SVneo de trofoblasto humano, extrayendo las proteínas de citoplasma en la fracción soluble y solubilizando las de membrana a partir del precipitado con un buffer con Tritón X-100 (0,5%). Se obtuvo un extracto reproducible de proteínas citoplasmáticas libre de proteínas de membrana y se adecuó para electroforesis bidimensional (2-DE) por precipitación con clorofomo/metanol. En conclusión, el método aquí descrito resulta adecuado para la obtención de sub-proteomas de citoplasma a partir de líneas celulares, con una reproducibilidad y recuperación óptimas para el análisis de perfiles proteómicos por electroforesis bidimensional |
| English abstract | The differential detergent fractionation method described by Rambsy and Makowski in 1999, was modified using a digitonin (0.015%) buffer to permeate HTR8/SVneo human trophoblast cells and obtain the cytoplasm proteins in the soluble fraction, while membrane proteins were dissolved from the pellet with Triton X-100 (0.5%) buffer. We obtained a reproducible membrane-free cytoplasm protein extract suitable for 2-DE, by chloroform/methanol precipitation. In conclusion, the method here described is appropriate for the separation of cytoplasm sub-proteomes from cell cultures, with an optimal reproducibility and recovery to perform proteomic profile analysis by bidimensional electrophoresis |
| Disciplines: | Biología |
| Keyword: | Biología celular, Bioquímica, Fraccionamiento celular, Proteómica, Trofoblastos, Digitonina, Detergentes |
| Keyword: | Biology, Cell biology, Biochemistry, Cell fractionation, Proteomics, Trophoblasts, Digitonine, Detergents |
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