| Journal: | Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical |
| Database: | PERIÓDICA |
| System number: | 000282580 |
| ISSN: | 0037-8682 |
| Authors: | Lucchesi, Paula M.A1 Arroyo, Guillermo H Etcheverría, Analía I Parma, Alberto E Seijo, Alfredo C2 |
| Institutions: | 1Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires, Facultad de Ciencias Veterinarias, Tandil, Buenos Aires. Argentina 2Hospital de Enfermedades Infecciosas Dr. Francisco Javier Muñiz, Servicio de Zoonosis, Buenos Aires. Argentina |
| Year: | 2004 |
| Season: | Mar |
| Volumen: | 37 |
| Number: | 2 |
| Pages: | 131-134 |
| Country: | Brasil |
| Language: | Inglés |
| Document type: | Artículo |
| Approach: | Experimental, analítico |
| English abstract | In the present study PCR was applied to detect leptospires in human urine. Several approaches for sample processing were evaluated to optimize the detection of leptospires in urine mixed with this bacterium. Furthermore, some changes in the composition of the reaction mix were studied. No amplification was observed in acidic urine, therefore neutralization of the sample immediately after collection is strongly recommended. PBS gave better results than Tris or NaOH as neutralizing reagents. Freezing and thawing of samples before processing yielded negative results. Elimination of epithelial cells, leukocytes and crystals by centrifugation at 3,000 rpm at room temperature increased sensitivity. In addition, both the washing step after collecting leptospires by centrifugation and the inclusion of 0.1% bovine serum albumin in the reaction mix minimized the interference of other inhibitory compounds. These modifications were useful to improve the detection of Leptospira in urine by PCR |
| Portuguese abstract | No presente estudo, a PCR foi utilizada para detectar leptospiras em urina humana. Diversas abordagens para processamento de amostra foram avaliadas para otimizar a detecção de leptospiras em urina misturada com esta bactéria. Além disso, algumas mudanças na composição da mistura de reação foram analisadas. Não se observou amplificação em urina ácida, conseqüentemente, a neutralização da amostra imediatamente após a coleta é fortemente recomendada. PBS apresentou melhores resultados que Tris ou NaOH como reagentes neutralizadores. Congelamento e descongelamento de amostras antes do processamento produziram resultados negativos. Eliminação de células epiteliais, leucócitos e cristais por centrifugação a 3.000rpm, à temperatura ambiente, aumentou a sensibilidade. Ademais, ambas, a etapa de lavagem após a coleta de leptospiras por centrifugação e a inclusão de albumina de soro bovino a 0,1% na mistura de reação minimizaram a interferência de outros compostos inibidores. Essas modificações contribuíram para melhorar a detecção de Leptospira em urina através da PCR |
| Disciplines: | Biología |
| Keyword: | Inmunología, Parasitología, Diagnóstico, Leptospira, PCR, Orina, Zoonosis |
| Keyword: | Biology, Immunology, Parasitology, Leptospira, PCR, Urine, Zoonoses, Diagnosis |
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