Uso de la lectina de Olneya tesota (PF2) para la purificación y detección histoquímica de una proteína de choque térmico (GP14) de bazo



Título del documento: Uso de la lectina de Olneya tesota (PF2) para la purificación y detección histoquímica de una proteína de choque térmico (GP14) de bazo
Revista: Biotecnia
Base de datos: PERIÓDICA
Número de sistema: 000402220
ISSN: 1665-1456
Autores: 1
1
2
3
1
Instituciones: 1Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo A.C., Hermosillo, Sonora. México
2Universidad de Sonora, Laboratorio de Bioquímica Clínica, Hermosillo, Sonora. México
3Hospital Infantil del Estado de Sonora, Departamento de Patologia, Hermosillo, Sonora. México
Año:
Volumen: 17
Número: 1
Paginación: 3-9
País: México
Idioma: Español
Tipo de documento: Artículo
Enfoque: Analítico, descriptivo
Resumen en español PF2 es una lectina de las semillas de Olneya tesota (Palo ferro) con afnidad alta hacia carbohidratos complejos triantenarios tetrasialilados. El objetivo de este estudio fue localizar glicoconjugados que interactúen con PF2 en secciones de tejido de bazo y purifcar glicoproteínas usando cromatografía de afnidad con PF2. Se incubaron secciones fnas de tejido de bazo con PF2 biotinilada y se observaron interacciones con linfocitos en los nódulos y estructuras internas de tipo reticular en la pulpa blanca. Se prepararon extractos de bazo para purifcar la glicoproteína detectada, usando dos etapas cromatográfcas, intercambio iónico (CMcelulosa) y afnidad (PF2-agarosa). Por electroforesis nativa y con SDS se mostró una glicoproteína monomérica de 14 kDa (GP14). Una vez digerida con una proteasa, se identifcaron seis secuencias peptídicas en la GP14. Cada péptido mostró 100% de homología a secuencias internas de diferentes proteínas de choque térmico de la familia de 70 kDa (HSP70). Esta similitud con las HSP fue confrmada por electrotransferencia e inmunodetección usando anticuerpos específcos para HSP70. En conclusión, la lectina PF2 tiene especifcidad hacia un glicoconjugado denominado GP14 que pudiera ser una glicoproteína de estrés del bazo humano, identifcada por primera vez
Resumen en inglés PF2 is a lectin from Olneya tesota (Palo ferro) seeds with high afnity towards triantennary tetrasialylated complex carbohydrates. The goal of this study was to localize PF2-interacting glycoconjugates in spleen tissue thin sections, and to purify glycoproteins using PF2 afnity chromatography. Biotinylated PF2 was incubated with thin sections of fxed spleen tissues and interactions with lymphocytes in nodules of splenic white pulp were observed. Two chromatographic steps, using ion exchange chromatography (CM-cellulose) and afnity chromatography (PF2-agarose) made possible the purifcation of a glycoprotein from spleen extracts. Both SDS-PAGE and PAGE showed a 14-kDa monomeric glycoprotein (GP14). GP14 was protease digested and the sequences of six peptides were identifed. Each of the GP14 peptides showed 100% homology to diferent internal sequences of the 70-kDa family of heat shock proteins (HSP70). The similarity with HSP was confrmed by Western blot using an antibody specifc to HSP70. In conclusion, PF2 lectin has specifcity toward a glycoconjugate named GP14 from spleen extract. GP14 could be a novel stress glycoprotein from human spleen
Disciplinas: Medicina,
Química,
Biología
Palabras clave: Medicina alternativa,
Bioquímica,
Botánica,
Leguminosae,
Olneya tesota,
Lectina,
Histoquímica,
Proteínas,
Bazo,
Choque térmico,
Glicoproteínas
Keyword: Medicine,
Chemistry,
Biology,
Alternative medicine,
Biochemistry,
Botany,
Leguminosae,
Olneya tesota,
Lectin,
Histochemistry,
Proteins,
Spleen,
Heat shock,
Glycoproteins
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