| Revista: | Visao academica |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000326610 |
| ISSN: | 1518-5192 |
| Autores: | Pinzon, Raquel P Zanin, Sandra M.W1 Miguel, Marilis D1 Klassen, G2 Barreira, Sandra M.W1 |
| Instituciones: | 1Universidade Federal do Parana, Curitiba, Parana. Brasil 2Universidade Federal do Parana, Departamento de Patologia Basica, Curitiba, Parana. Brasil |
| Año: | 2008 |
| Periodo: | Jul-Dic |
| Volumen: | 9 |
| Número: | 2 |
| Paginación: | 43-53 |
| País: | Brasil |
| Idioma: | Portugués |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Aplicado, descriptivo |
| Resumen en inglés | The mannose-binding lectin (MBL) is a human serum protein, which is secreted by the liver and is calcium-dependent. The MBL is an important constituent of the innate immune system and it may act by activating the complement system through the lectins pathway and by its characteristic of being an opsonin, facilitating the pathogens phagocytosis. This protein is associated to infectious and autoimmune disease, interfering in the individual susceptibility and in the disease severity. The goal of this work was isolating and purifying the MBL from human serum, through a chromatographic method, in order to use it in a future monoclonal antibody production. The method used to isolate and purify the MBL was the affinity chromatography, performed in columns. The method’s protocol was developed during the study, based on information from previous published reports. In this study, some columns of different sizes were used and the fixed phase was prepared with Sepharose 6B-D-mannose. The fractions obtained through the chromatography were taken to spectrophotometer analysis, using the absorbance as the determination criteria for the MBL presence in the samples. The protein solution obtained through the chromatography method was concentrated to allow the next step, the eletrophoresis identification. The identification result indicated that the isolated protein is the MBL. The chromatographic method developed during this study showed to be able to isolate and purify the MBL; nevertheless, some adjusts still need to be made to improve the method, in order to enhance its speedy and efficiency |
| Resumen en portugués | A lectina ligadora de manose (MBL) é uma proteína encontrada no soro humano, secretada pelo fígado e dependente de cálcio. A MBL é um importante elemento do sistema imune inato, que pode atuar por meio da ativação do sistema do complemento pela via das lectinas e por sua característica de opsonina, facilitando a fagocitose dos patógenos. Esta proteína está associada a doenças infecciosas e auto-imunes, com interferência tanto na susceptibilidade quanto na severidade das patologias. O objetivo deste trabalho foi isolar e purificar a MBL do soro humano, por meio de cromatografia, para uma futura produção de anticorpos monoclonais. O método utilizado para separar e isolar a proteína do pool de soro foi cromatografia por afinidade, realizada em coluna. O protocolo do método foi desenvolvido durante a execução deste trabalho, com base em informações de estudos realizados e publicados anteriormente. Neste estudo, foram utilizadas colunas de diferentes dimensões e a fase estacionária constituiu-se de gel Sepharose 6B-D-manose. As frações obtidas na cromatografia foram submetidas à análise espectrofotométrica, considerando a absorbância como critério de verificação da presença da MBL na amostra. A solução de proteína resultante da separação cromatográfica foi concentrada para permitir a execução da próxima etapa, a identificação por eletroforese. O resultado da eletroforese indicou que a proteína isolada é a MBL. O método cromatográfico desenvolvido neste trabalho mostrou-se eficaz para isolar e purificar a MBL; entretanto, ainda são necessários ajustes para aprimorar o método, a fim de aumentar a rapidez e o rendimento |
| Disciplinas: | Química |
| Palabras clave: | Bioquímica, Inmunología, Lectinas, Electroforesis, Anticuerpos |
| Keyword: | Chemistry, Biochemistry, Lectins, Electrophoresis, Antibodies, Immunology |
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