Isolamento e regeneração de protoplastos de Magnaporthe grisea



Título del documento: Isolamento e regeneração de protoplastos de Magnaporthe grisea
Revista: Summa phytopathologica
Base de datos: PERIÓDICA
Número de sistema: 000285643
ISSN: 0100-5405
Autores: 1


Instituciones: 1Universidade Federal de Vicosa, Vicosa, Minas Gerais. Brasil
Año:
Periodo: Jul-Sep
Volumen: 32
Número: 3
Paginación: 232-238
País: Brasil
Idioma: Portugués
Tipo de documento: Nota breve o noticia
Enfoque: Experimental
Resumen en inglés Protoplasts are important biological tools in filamentous fungi research. Fungal protoplasts have been extensively used in experiments with genetic transformation. Protoplastization of Magnaporthe grisea was accomplished with Novozym 234, however, this enzymatic complex is no commercially available for purchase. Thus, the efficiency of several other commercial enzymes in M. grisea protoplasts preparation was investigated. At the same time, osmotic buffer, digestion time and regeneration rate were also analyzed. The highest protoplasts production was obtained with Lysing Enzymes plus Cellulase Onozuka R-10. The use of 10 or 15 mg of each enzymatic complex in 3 mL of osmotic buffer was most effective for the protoplasts yields. The best osmotic buffer was MgSO4 1.2 M / NaH2PO4 0.01 M, pH 5.8, followed by MgSO4 0.8 M / NaH2PO4 0.01 M, pH 5.8. The M. grisea protoplasts yield, evaluated at each 60 min, increased with 3 to 6 hours of incubation. However, the highest regeneration frequency (19.4%) was recorded for protoplasts obtained with 3 hours of enzymatic hydrolyse
Resumen en portugués Protoplastos são ferramentas biológicas importantes para pesquisas em fungos filamentosos, sendo empregados intensamente em transformação genética. O isolamento de protoplastos de Magnaporthe grisea foi facilitado com Novozym 234, contudo, este complexo enzimático encontra-se indisponível no mercado. Assim, objetivou-se comparar a eficiência de enzimas líticas disponíveis comercialmente na obtenção de protoplastos de M. grisea. Paralelamente, analisaram-se estabilizadores osmóticos, tempos de digestão e freqüência de regeneração. Maior produção de protoplastos foi obtida com o uso simultâneo de Lysing Enzymes e Cellulase Onozuka R-10. O uso de 10 ou 15 mg de cada complexo enzimático, em 3 mL de estabilizador osmótico, resultou em maior liberação de protoplastos. O melhor estabilizador osmótico foi MgSO4 1,2 M / NaH2PO4 0,01 M, pH 5,8, seguido por MgSO4 0,8 M / NaH2PO4 0,01 M, pH 5,8. O isolamento de protoplastos foi monitorado a cada 60 minutos, atingindo o máximo após incubação por 3 a 6 horas. No entanto, maior freqüência de regeneração (19,4%) foi registrada para protoplastos obtidos após 3 horas de hidrólise enzimática
Disciplinas: Agrociencias,
Biología
Palabras clave: Fitopatología,
Biología celular,
Pyricularia grisea,
Magnaporthe grisea,
Protoplastos,
Actividad enzimática,
Regeneración
Keyword: Agricultural sciences,
Biology,
Phytopathology,
Cell biology,
Pyricularia grisea,
Magnaporthe grisea,
Protoplasts,
Enzymatic activity,
Regeneration
Texto completo: Texto completo (Ver HTML)