| Revista: | Brazilian archives of biology and technology |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000346637 |
| ISSN: | 1516-8913 |
| Autores: | Fujii, Simone1 Ono, Elisabete Yurie Sataque2 Ribeiro, Ricardo Marcelo Reche1 Assuncao, Fernanda Garcia Algarte1 Takabayashi, Cassia Reika1 Oliveira, Tereza Cristina Rocha Moreira de1 Itano, Eiko Nakagawa3 Ueno, Yoshio4 Kawamura, Osamu5 Hirooka, Elisa Yoko1 |
| Instituciones: | 1Universidade Estadual de Londrina, Departamento de Tecnologia de Alimentos e Medicamentos, Londrina, Parana. Brasil 2Universidade Estadual de Londrina, Departamento de Bioquimica, Londrina, Parana. Brasil 3Universidade Estadual de Londrina, Departamento de Ciencias Patologicas, Londrina, Parana. Brasil 4Science University of Tokyo, Faculty of Pharmaceutical Science, Shinjuku-ku, Tokyo. Japón 5Kagawa University, Faculty of Agriculture, Miki-cho, Kagawa. Japón |
| Año: | 2007 |
| Periodo: | Mar |
| Volumen: | 50 |
| Número: | 2 |
| Paginación: | 349-359 |
| País: | Brasil |
| Idioma: | Inglés |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, aplicado |
| Resumen en inglés | An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) for ochratoxin A (OTA) detection in green, roasted and instant coffees was developed using anti-OTA monoclonal antibody. Immunological reagents prepared were OTA-BSA (4.76 mg/mL), anti-OTA.7 MAb (2x103-fold dilution) and HRP-anti IgG (103-fold dilution). The detection limit was 3.73 ng OTA/g and correlation coefficients (r) between this immunoassay and high performance liquid chromatography were 0.98 for green coffee, 0.98 for roasted and 0.86 for instant. OTA levels detected by ic-ELISA were higher than by HPLC, with ELISA/HPLC ratio of 0.66 - 1.46 (green coffee), 0.96 - 1.11 (roasted) and 0.93 - 1.82 (instant). ELISA recoveries for OTA added to coffee (5 - 70 ng/g) were 81.53 % for green coffee, 46.73 % for roasted and 64.35 % for instant, while recoveries by HPLC were 80.54 %, 45.91 % and 55.15 %, respectively. Matrices interferences were minimized by samples dilution before carrying out the ELISA assay. The results indicate that MAb-based ic-ELISA could be a simple, sensitive and specific screening tool for OTA detection, contributing to quality and safety of coffee products |
| Resumen en portugués | ELISA competitivo indireto (ic-ELISA) baseado em anticorpos monoclonais foi desenvolvido para a detecção de ocratoxina A (OTA) em café verde, torrado e instantâneo. Os reagentes imunológicos necessários à reação consistiram de OTA-BSA (4,76 mg/mL), anti-OTA.7 MAb (diluído 2x103) e anti IgG-HRP (diluído 103), apresentando limite de detecção de 3,73 ng OTA/g. Os coeficientes de correlação (r) entre o imunoensaio e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foram de 0,98 (café verde), 0,98 (torrado) e 0,86 (instantâneo). Ic-ELISA detectou valores superestimados de OTA em relação a CLAE, com valor ELISA/CLAE variando de 0,66 – 1,46 (café verde), 0,96 – 1,11 (torrado) e 0,93 – 1,82 (instantâneo). As recuperações médias de OTA adicionada em café (5 - 70 ng/g) foram de 81,53 % (café verde), 46,73 % (torrado) e 64,35 % (instantâneo) por ELISA, em relação a 80,54 %, 45,91 % e 55,15 % por CLAE, respectivamente. A interferência de matriz no imunoensaio foi minimizada pela diluição das amostras previamente à análise por ELISA. O ic-ELISA desenvolvido pode ser considerado uma técnica alternativa simples, sensível e específica para análise de OTA, contribuindo para a qualidade e segurança de produtos de café |
| Disciplinas: | Biología, Agrociencias |
| Palabras clave: | Biotecnología, Análisis toxicológico, Café, Ocratoxina A, ELISA, Anticuerpos monoclonales |
| Keyword: | Biology, Agricultural sciences, Biotechnology, Toxicological analysis, Coffee, Ochratoxin A, ELISA, Monoclonal antibodies |
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