The Sticholysin I mutants St I E2C and St I R52C show similar binding to liposomal vesicles but differ in their permeabilizing activity



Título del documento: The Sticholysin I mutants St I E2C and St I R52C show similar binding to liposomal vesicles but differ in their permeabilizing activity
Revista: Biotecnología aplicada
Base de datos: PERIÓDICA
Número de sistema: 000351707
ISSN: 0864-4551
Autores: 1
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Instituciones: 1Universidad de La Habana, Facultad de Biología, La Habana. Cuba
2Centro Nacional de Investigaciones Científicas, La Habana. Cuba
3Universidade de Sao Paulo, Instituto de Quimica, Sao Paulo. Cuba
Año:
Volumen: 28
Número: 1
Paginación: 13-18
País: Cuba
Idioma: Inglés
Tipo de documento: Artículo
Enfoque: Experimental, aplicado
Resumen en español El mecanismo de formación de poros de las actinoporinas es un proceso de varias etapas hasta la formación de un poro funcional. Se requiere un sitio de unión a fosfocolina, un grupo de anillos aromáticos y una región básica, para la interacción inicial con la membrana. La región N-terminal es relevante para la formación del poro. En este trabajo se diseñó y obtuvo dos mutantes de Sticolisina I (St I) con Cys en regiones funcionalmente relevantes para la interacción con membranas: St I E2C (en la región N-terminal) y St I R52C (en el sitio de unión a membranas). El reemplazo de los residuos Glu-2 y Arg-52 por Cys no produce cambios notables en la conformación de St I, según determinaciones de fluorescencia y espectroscopía de dicroísmo circular. El primer cambio no afectó la actividad permeabilizante. La disminución relativa en la capacidad formadora de poros en St I R52C no se vincula a su menor capacidad de asociación con la membrana. St I E2C y St I R52C conservan las principales características conformacionales de St I nativa y muestran similar capacidad de unión a vesículas liposomales, mientras que difieren en cuanto a actividad permeabilizante. Estos dos mutantes son herramientas útiles para estudiar los pasos de los mecanismos de permeabilización de las Sticholisinas, en especial los que ocurren tras su unión a las membranas, mediante el uso de sondas específicas para grupos tiol tales como indicadores fluorescentes y del momento del espín
Resumen en inglés The mechanism of pore formation by actinoporins is a multistep process, involving binding of water soluble monomer to membrane and subsequent oligomerization of monomers on the membrane surface, forming a functional pore. However, molecular details of membrane insertion mechanism and oligomerization are not clear. A phosphocholine- binding site and a surface cluster of aromatic rings, together with a basic region, are important to the initial interaction with membrane and the N-terminal region is relevant in the pore formation. Aiming to deepen into the structure-function relationship in sticholysins, we designed and produced two Cys mutants of recombinant sticholysin I (rSt I) in relevant functional regions for membrane interaction: St I E2C (in the N-terminal region) and St I R52C (in the membrane binding site). Conformational studies suggested that the replacement of Glu-2 and Arg-52 by a Cys residue in rSt I not noticeably changes protein conformation as assessed by fluorescence and CD spectroscopy, the first change not affecting toxin’s permeabilizing ability. The relative decrease in the pore forming capacity of St I R52C is not related with a smaller binding capacity of this mutant to membrane. In summary, St I E2C and St I R52C retain the main conformational properties of the wild type and show similar binding to liposomal vesicles while differing in their permeabilizing activity. St I E2C and St I R52C constitute good tools to study those steps of the permeabilizing mechanism of sticholysins that take place after binding to membrane, using thiol-specific probes such as fluorescent and spin labels
Disciplinas: Biología,
Química
Palabras clave: Biología celular,
Bioquímica,
Actinoporina,
Mecanismo de acción,
Membrana celular,
Sticholisina
Keyword: Biology,
Chemistry,
Cell biology,
Biochemistry,
Actinoporin,
Action mechanism,
Cell membrane,
Sticholysin
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