| Revista: | Biotecnología aplicada |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000325429 |
| ISSN: | 0864-4551 |
| Autores: | Faife, Evelyn1 Rodríguez, Teresita1 Rabaza, Yamilet1 Badía, Teresa1 Victores, Svieta1 Castillo, Adolfo1 |
| Instituciones: | 1Centro de Inmunología Molecular, Departamento de Investigación de Procesos, La Habana. Cuba |
| Año: | 2008 |
| Periodo: | Jul-Sep |
| Volumen: | 25 |
| Número: | 3 |
| Paginación: | 247-253 |
| País: | Cuba |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, aplicado |
| Resumen en español | La mayor dificultad en los procesos de producción de proteínas recombinantes en cultivos de células de mamíferos, radica en el extenso y laborioso proceso de selección y adaptación de la línea celular al medio de cultivo, debido a la poca frecuencia de los clones deseados dentro de una población distribuida de forma heterogénea. En este estudio se compararon los parámetros cinéticos de diferentes clones de la línea de mieloma recombinante NSO que secreta una inmunoglobulina IgG1 (hR3), obtenidos mediante clonajes seriados y adaptación a medio libre de proteínas. Además se evaluaron las características físico-químicas, la actividad biológica y la constante de afinidad del anticuerpo monoclonal producido por cada uno de los clones. Se emplearon dos sistemas de cultivo: cultivos adheridos en bioreactores de fibra hueca y cultivos en suspensión en frascos spinners, para evaluar el efecto de las condiciones de cultivo en la estructura y heterogeneidad funcional del anticuerpo. Se evidenció un marcado impacto de los procesos de adaptación y selección en la microheterogeneidad de la población celular, basado en parámetros cinéticos. A pesar de no observarse diferencias en algunas características físico-químicas del producto, como el peso molecular, el reconocimiento específico y el punto isoeléctrico, sí se observaron diferencias en la actividad biológica y la constante de afinidad en los diferentes clones, y en el producto obtenido a partir de un mismo clon en diferentes sistemas de fermentación |
| Resumen en inglés | The extensive and labor-intensive process of selection and adaptation of a cell line to culture medium is the biggest limitation of recombinant protein production in mammalian cell culture, due to a very low frequency of the desired clones within a heterogeneously-distributed population of cells. In this study, the kinetic parameters of different clones of a recombinant NS0 myeloma cell line, obtained by serial cloning and adaptation to protein-free medium and secreting the hR3 IgG1 immunoglobulin, were compared. The physico-chemical parameters, biological activity and antibody affinity constant of the antibody produced was determined for each clone. Two culture systems were used to evaluate the effect of culture conditions on antibody structure and functional heterogeneity: adhesion cell cultures in hollow fiber bioreactors and suspension cultures in spinner flasks. A distinct impact of adaptation and selection processes was evidenced on the microheterogeneity of the cell population, based on kinetic parameters. Some physico-chemical properties of the product such as: molecular weight, specific recognition and isoelectric point remained unaltered, while differences were observed in the biological activity and the affinity constant of different clones and the given clone in different fermentation systems |
| Disciplinas: | Biología, Medicina |
| Palabras clave: | Biología celular, Inmunología, Oncología, Proteínas recombinantes, Mieloma, Cultivo de células, Anticuerpos monoclonales, Medios de cultivo |
| Keyword: | Biology, Medicine, Cell biology, Immunology, Oncology, Recombinant proteins, Myeloma, Cell culture, Monoclonal antibodies, Culture media |
| Texto completo: | Texto completo (Ver PDF) |
