Double Fractionation by Polyacrylamide Gel Electrophoresis (DF-PAGE): new method for quantitative proteomics studies



Título del documento: Double Fractionation by Polyacrylamide Gel Electrophoresis (DF-PAGE): new method for quantitative proteomics studies
Revista: Biotecnología Aplicada
Base de datos: PERIÓDICA
Número de sistema: 000437458
ISSN: 0864-4551
Autores: 1
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Instituciones: 1Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, Dirección de Investigaciones Biomédicas, La Habana. Cuba
Año:
Periodo: Oct-Dic
Volumen: 33
Número: 4
País: Cuba
Idioma: Inglés
Tipo de documento: Artículo
Enfoque: Experimental, aplicado
Resumen en español . Para aumentar las posibilidades de detección de proteínas de baja abundancia en mezclas complejas mediante técnicas de proteómica, es esencial utilizar métodos de separación de proteínas o péptidos para reducir la complejidad de la muestra biológica. Sin embargo, a pesar del amplio uso de varias técnicas electroforéticas, no se había investigado con anterioridad la utilidad de la electroforesis de zona para el fraccionamiento de mezclas complejas de péptidos. En el presente trabajo se estableció un nuevo método para estudios de proteómica, denominado Doble Fraccionamiento por PAGE (DF-PAGE). Este combina el fraccionamiento de proteínas por SDS-PAGE, la hidrólisis enzimática en el gel y la separación de péptidos por PAGE sin SDS, esta última aplicada por primera vez para el fraccionamiento y la simplificación de mezclas complejas de péptidos. Además, fue necesario diseñar para el DF-PAGE un nuevo sistema discontinuo de soluciones tampón para la selección de péptidos ácidos (pI ≤ 5.5). El DF-PAGE permitió identificar un mayor número de proteínas que la PAGE-SDS y la focalización isoeléctrica en solución. Su aplicación a la caracterización del principio activo de la vacuna VA-MENGOC-BC permitió identificar 67 proteínas previamente no detectadas con las técnicas tradicionales. También se identificaron mediante el DFPAGE una serie de proteínas moduladas diferencialmente por el péptido antitumoral CIGB-552 en la línea celular HT-29 de adenocarcinoma de colon, lo cual contribuyó a la caracterización de las bases moleculares de la acción de dicho péptido
Disciplinas: Química
Palabras clave: Bioquímica,
Proteómica,
Electroforesis,
Fraccionamiento de péptidos,
Proteínas de membrana
Keyword: Biochemistry,
Proteomics,
Electrophoresis,
Peptide fractionation,
Membrane proteins
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