| Revista: | Biotecnología aplicada |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000351711 |
| ISSN: | 0864-4551 |
| Autores: | Armas, Yassier de1 Capó, Virginia1 López, Ledys X1 Mederos, Lilian2 Díaz, Raúl2 |
| Instituciones: | 1Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kouri", Departamento de Anatomía Patológica, La Habana. Cuba 2Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kouri", Laboratorio Nacional de Referencia e Investigaciones de Tuberculosis y Micobacterias, La Habana. Cuba |
| Año: | 2011 |
| Volumen: | 28 |
| Número: | 1 |
| Paginación: | 40-43 |
| País: | Cuba |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, aplicado |
| Resumen en español | La extracción de ADN de tejidos embebidos en parafina (TEP) es crucial en muchos estudios moleculares. Varios han sido los protocolos utilizados para conseguir tal propósito. En esta investigación se compararon tres métodos de extracción de ADN con la finalidad de seleccionar uno para el trabajo en nuestro laboratorio. Se tomaron diez ganglios linfáticos de diez fallecidos por sida, para su estudio histológico y bacteriológico. El ADN se extrajo por calentamiento a 100 °C (método A); con el empleo de resina quelante Chelex-100 (método B) y por digestión con proteinasa K (método C). Para la identificación de Mycobacterium tuberculosis se amplificó una región de la secuencia específica de inserción IS 6110, mediante la reacción en cadena de la polimerasa. El ADN de los TEP se obtuvo degradado, con diferencias significativas de pureza. Solo se logró amplificación con los métodos B y C; este último fue el más laborioso. El método que requirió resina quelante Chelex-100 (método B) fue el más útil: se obtuvo ADN con calidad y cantidad suficiente en un menor tiempo. Por tanto, este método puede ser considerado como una buena opción en patología molecular |
| Resumen en inglés | DNA extraction from paraffinembedded tissue (PET) is a critical step for many molecular techniques. Several protocols have been carried out for this objective according to the literature. In the present study, the performances of three DNA extraction methods from PET were compared to establish the optimal protocol for our laboratory. Ten lymph nodes from ten patients dying with of AIDS were investigated. Histological and bacteriological studies were performed in lymph nodes samples. DNA was extracted using three methods: boiling for 20 minutes in distilled water (Method A); boiling for 30 minutes in 5% Chelex-100 resin solution (Method B) and a 4-hours lasting proteinase K digestion (Method C). PCR with specific sequence (IS 6110) were evaluated for the identification of Mycobacterium tuberculosis in PET. The DNA extract by the three methods was degraded. Statistical differences were observed when three DNA extraction methods were compared according to the purity of extracted DNA. Only with Methods B and C successful amplification was obtained. The last method (C) was the more time consuming of all. This results demonstrated that the Chelex-100 DNA extraction method (Method B), which uses a quelating resin, is useful as a routine method to achieve DNA extraction with good enough quality and quantity in a short period of time from PET. Method B is a good option in molecular pathology research |
| Disciplinas: | Biología, Química, Medicina |
| Palabras clave: | Bioquímica clínica, ADN, Extracción química, Técnicas histológicas, Mycobacterium tuberculosis |
| Keyword: | Biology, Chemistry, Medicine, Clinical biochemistry, DNA, Chemical extraction, Histological techniques, Mycobacterium tuberculosis |
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