| Revista: | Archivos de medicina veterinaria (Valdivia) |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000386044 |
| ISSN: | 0301-732X |
| Autores: | Faggion, S.A1 Salvador, A.R1 Jacobino, K.L1 Bortolotto, L.F.B1 Lopes, M.B1 Silva, M1 Santos, E.V1 Fachin, A.L1 Franca, S.C1 Marins, M1 |
| Instituciones: | 1Universidade de Ribeirao Preto, Unidade de Biotecnologia, Ribeirao Preto, Sao Paulo. Brasil |
| Año: | 2013 |
| Volumen: | 45 |
| Número: | 2 |
| Paginación: | 197-201 |
| País: | Chile |
| Idioma: | Inglés |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental |
| Resumen en español | La bacteria rickettsia Ehrlichia canis es el agente etiológico de la ehrlichiosis monocítica canina, una de las más importantes enfermedades caninas transmitidas por garrapatas. En este estudio, un ensayo de amplificación isotérmica de ADN mediada por asas (LAMP) se desarrolló para la detección del ADN de E. canis usando iniciadores LAMP enfocando el operón groESL. Se produjeron reacciones a 60°C por 60 min y los resultados se visualizaron por electroforesis en gel. Se obtuvo una exitosa amplificación al usar ADN plasmídico conteniendo un fragmento del operón groESL y ADN extraído de muestras de sangre que dieron positivo para E. canis vía PCR en tiempo real. La especificidad de amplificación fue confirmada por la enzima de restricción EcoRI de sitios internos en iniciadores LAMP y no se observó ninguna reactividad cruzada con muestras de sangre positivas para Babesia spp., otro agente patógeno común transmitido por garrapatas. El alto costo de análisis de ácido nucleico es uno de los inconvenientes para su uso a gran escala como pruebas diagnósticas rutinarias. El ensayo LAMP para E. canis desarrollado aquí es una alternativa interesante para PCR, una vez que no requiere un termociclador programado y, consecuentemente, reduce costos para el laboratorio clínico veterinario |
| Resumen en inglés | The rickettsial bacterium Ehrlichia canis is the etiological agent of canine monocytic ehrlichiosis, one of the most important canine tick-borne diseases in the world. In this study, a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay was developed for detection of E. canis DNA using LAMP primers targeting the groESL operon. Reactions were performed at 60°C for 60 min and the results were visualized by gel electrophoresis. Successful amplification was obtained using plasmid DNA containing a fragment of the groESL operon and DNA extracted from blood samples that tested positive for E. canis by real-time PCR. The specificity of amplification was confirmed by EcoRI restriction of internal sites in the LAMP primers and no cross-reactivity with blood samples positive for Babesia spp., another common tick-borne pathogen, was observed. The high cost of nucleic acid tests (NAT) is one of the disadvantages for their large-scale use as routine diagnostic tests. The E. canis LAMP assay developed here is an interesting alternative to PCR since it does not require a thermocycler, thus reducing costs for the veterinary clinical laboratory |
| Disciplinas: | Medicina veterinaria y zootecnia |
| Palabras clave: | Medicina veterinaria, Pequeñas especies, Ehrlichia canis, Bioensayos, ADN, Perros |
| Keyword: | Veterinary medicine and animal husbandry, Companion animals, Veterinary medicine, Ehrlichia canis, Bioassays, DNA, Dogs |
| Texto completo: | Texto completo (Ver PDF) |
