| Revista: | Universidad y ciencia |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000326125 |
| ISSN: | 0186-2979 |
| Autores: | Rocha Revilla, J.C1 Rodríguez Herrera, R1 Aguilar González, Cristóbal Noé1 Ramírez Ramírez, E2 Lara Victoriano, Faustino2 |
| Instituciones: | 1Universidad Autónoma de Coahuila, Facultad de Ciencias Químicas, Saltillo, Coahuila. México 2Centro Internacional de Servicios Fitosanitarios S.A. de C.V., Saltillo, Coahuila. México |
| Año: | 2009 |
| Periodo: | Dic |
| Volumen: | 25 |
| Número: | 3 |
| Paginación: | 245-252 |
| País: | México |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Analítico, descriptivo |
| Resumen en español | Técnicas moleculares basadas en ADN e inmunológicas han sido usadas para la detección de microorganismos debido a su sensibilidad, especificidad y rapidez. Sin embargo, cuando se trata de identificar bacterias con cero tolerancia en los niveles de presencia (eg. Pantoea stewartii), los métodos de análisis moleculares e inmunológicos no ofrecen el 100 por ciento de certeza de su detección. El objetivo de la presente investigación fue combinar las técnicas ELISA y PCR, con el fin de complementar las ventajas de cada una de ellas para detectar eficientemente la bacteria directamente de la semilla. Se utilizó una muestra de semilla de maíz importada de los Estados Unidos de América con altas probabilidades de estar infectada con Pantoea stewartii, lo cual se verificó por medio de ELISA. Una vez confirmada la presencia de la bacteria se procedió a su aislamiento e identificación por pruebas microscópicas, bioquímicas, fisiológicas, hipersensibilidad en tabaco, pruebas de patogenicidad y amplificación de rDNA 16S. Posteriormente, se optimizó la técnica de inmuno-PCR (temperatura de alineamiento de iniciadores, concentración de anticuerpos, temperatura de incubación y marca de tubos). El estudio demostró que es posible amplificar el ADN de P. stewartii directamente de la semilla de maíz, con una temperatura de alineamiento de 62 y 65 C, tiempos de incubación de 1-3 horas, concentraciones de anticuerpos de 5:200 y 10:200 y con tubos marca Fisher y Axigen. La adaptación y optimización de la técnica inmuno-PCR es importante dado que se podrían reducir los riesgos de propagación de P. stewartii hacia lugares libres de ella |
| Resumen en inglés | Immunological and molecular techniques based on DNA have been used for microorganism detection due to their sensitivity, specificity and speed. However, when the identification of bacteria with zero tolerance is required (eg. Pantoea stewartii), molecular and immunological techniques do not offer a 100% reliability. The objective of this study was to combine the ELISA and PCR techniques in order to complement their advantages and efficiently detect bacteria directly on seeds. A maize seed sample imported from the USA and with a high probability of being infected with Pantoea stewartii, and this was verified with ELISA, was used in this study. Having confirmed the presence of the bacterium, it was isolated and identified with microscopical, biochemical, physiological, tobacco hypersensibility, pathogenicity and PCR amplification of rDNA 16S tests. The immuno-PCR technique was then optimised (primer annealing temperature, antibody concentration, incubation temperature and microtube branding). The study showed that it is possible to amplify the DNA of P. stewartii directly from maize seeds, with an annealing temperature of 62 and 65 C, incubation times of 1-3 hours, antibody concentrations of 5:200 and 10:200 and Fisher and Axigen microtubes. The adaptation and optimisation of the immuno-PCR technique is important as it may aid in the reduction of the risk of P. stewartii propagation towards areas free of bacteria |
| Disciplinas: | Química, Agrociencias |
| Palabras clave: | Bioquímica, Fitopatología, Inmunología, ELISA, Anticuerpos, Marchitez de Stewart |
| Keyword: | Chemistry, Agricultural sciences, Biochemistry, Phytopathology, ELISA, Antibodies, Stewart's wilt, Immunology |
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