| Revista: | Terra latinoamericana (Edo. de Méx.) |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000450737 |
| ISSN: | 0187-5779 |
| Autores: | Pérez Hernández, Valentín1 Hernández Guzmán, Mario2 Valenzuela Encinas, César1 Alcántara Hernández, Rocío2 Estrada Alvarado, Isabel2 Dendooven, Luc2 Marsch, Rodolfo2 Gutiérrez Miceli, Federico1 Ruíz Valdiviezo, Víctor M1 Montes Molina, Joaquín A1 |
| Instituciones: | 1Instituto Tecnológico de Tuxtla Gutiérrez, Tecnológico Nacional de México, Tuxtla Gutiérrez, Chiapas. México 2Instituto Politécnico Nacional, Centro de Investigación y de Estudios Avanzados, Ciudad de México. México |
| Año: | 2021 |
| Periodo: | Ene-Dic |
| Volumen: | 39 |
| País: | México |
| Idioma: | Inglés |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, analítico |
| Resumen en español | Se desarrolló un método modificado para la lisis bacteriana y la extracción directa de ADN de suelo alcalino-salino con mínima fragmentación y con esto, evitar posiblemente, la formación de quimeras a partir de pequeños fragmentos de ADN durante la amplificación por PCR. Se utilizó el kit Power Soil DNA (Mo Bio™ Laboratories, Inc.) como técnica de referencia. El método reportado se basó en la lisis celular en presencia de dodecilsulfato de sodio (SDS), ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) y lisis celular mecánica empleando un equipo Fast-Prep-24™, seguido de un ciclo de congelación a -40 °C durante 60 min y descongelación a 65 °C durante 20 min. El método de extracción se probó para suelos alofónicos con grandes concentraciones de materia orgánica, ácidos fúlvicos y húmicos, conductividad electrolítica (CE) entre 2.6 dS m-1 y 39.9 dS m-1, y pH entre 8.8 y 10.9. La concentración del ADN extraído de los suelos osciló entre 2.35 (Texcoco-2) y 3.66 (Texcoco-1) µg de ADN g-1 de suelo, y el rendimiento dependió del tipo de suelo empleado. El método produjo ADN lo suficientemente puro para la amplificación del gen 16S rADN por PCR cuando se añadió albúmina de suero bovino (BSA) al buffer de reacción. El ADN obtenido presenta suficiente calidad y rendimiento para su uso posterior para la secuenciación del gen 16S rADN, o para un secuenciamiento directo, i.e. secuenciación del metagenoma |
| Resumen en inglés | A modified method for the direct extraction of DNA from alkaline-saline soils with minimum DNA fragmentation and a possible reduction in chimera formation during polymerase chain reaction (PCR) was developed. The commercial extraction kit Power Soil DNA (Mo Bio™ Laboratories, Inc.) was used as a reference technique. The method reported here was based on cell lysis employing ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), sodium dodecyl sulfate (SDS), and cell disruption with mechanical force with FastPrep-24™ equip followed by one cycle of freezing at -40 °C for 60 min and thawing at 65 °C for 20 min. The extraction method was tested for allophonic soils with large concentrations of organic matter, fulvic and humic acids, electrolytic conductivity (EC) ranging between 2.6 dS m-1 and 39.9 dS m-1, and pH between 8.8 and 10.9. The yield of DNA extracted depended on soil type, i.e., DNA extracted from soil varied between 2.35 (Texcoco-2) to 3.66 (Texcoco-1) μg DNA g-1 soil. The proposed method in this study produced enough DNA with yield and quality for PCR amplification of 16S rDNA when bovine serum albumin (BSA) was added to the reaction buffer. The DNA obtained had sufficient quality and yield for later use for 16S sequencing or possible use in other sequencing technologies, e.g. whole metagenome shotgun sequencing |
| Disciplinas: | Agrociencias, Biología |
| Palabras clave: | Suelos, Genética, Suelos alcalinos, Suelos salinos, ADN, Microbiología, México, PCR |
| Keyword: | Soils, Genetics, Alkaline soils, Saline soils, DNA, Microbiology, Mexico, PCR |
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