| Revista: | Revista mexicana de fitopatología |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000450768 |
| ISSN: | 0185-3309 |
| Autores: | Triana Gutiérrez, Rosa Isela1 Gutiérrez Espinosa, María Alejandra1 Mora Aguilera, Gustavo1 Cano Medrano, Raquel1 Velázquez Monreal, José Joaquín2 |
| Instituciones: | 1Colegio de Postgraduados, Campus Montecillo, Texcoco, Estado de México. México 2Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, Tecomán, Colima. México |
| Año: | 2021 |
| Periodo: | May |
| Volumen: | 39 |
| Número: | 2 |
| Paginación: | 354-370 |
| País: | México |
| Idioma: | Español, inglés |
| Tipo de documento: | Nota breve o noticia |
| Enfoque: | Experimental, analítico |
| Resumen en español | Una posible alternativa para el control de CTV y CLas en Citrus sinensis es el empleo de resistencia genética adquirida. El estudio de este mecanismo, requiere normalizar con genes de referencia. Por lo tanto, se desarrolló un protocolo de cuantificación de expresión génica mediante RT-qPCR para evaluar el uso potencial de GAPDH, ACTINA, F-BOX, COX y 18S rRNA como genes de referencia en cítricos. Un total de nueve plantas infectadas con CTV (3), CLas (3) y sanas (3) se emplearon para seleccionar una muestra compuesta de ocho hojas/planta. El protocolo no comercial se desarrolló y optimizó en todas sus etapas variando concentración de reactivos, iniciadores y sustrato de reacción. La extracción del ARN total con CTAB al 2% estuvo en el rango de 200-1000 ng µL-1. La retrotranscripción produjo en promedio 1069 ng µL-1 ADNc. Los productos de los genes de referencia GAPDH, ACTINA y F-BOX exhibieron curvas de disociación sin expresión de dímeros, Ct ≤ 28 y eficiencias de reacción en el rango de 90-110%. En todas las expresiones de genes, muestras con CTV tuvieron los Ct´s más tardíos (25-27) seguido de las muestras sanas (24-25). Sin embargo, GAPDH y ACTINA presentaron la expresión génica más estable (ln 1/M = 2.83) por lo que estos genes se proponen para normalización. El protocolo RT-qPCR fue también específico y eficiente para el gen CDR13, putativamente asociado a resistencia sistémica adquirida a CLas, lo que sugiere su viabilidad en estudios de resistencia de C. sinensis/C. aurantium en respuesta a la infección de CTV y CLas |
| Resumen en inglés | A possible alternative for the control of CTV and CLas in Citrus sinensis is the use of systemic acquired resistance. The study of this mechanism requires normalizing with reference genes. Therefore, a gene expression quantification protocol using RT-qPCR was developed to evaluate the potential use of GAPDH, ACTIN, F-BOX, COX, and 18S rRNA as reference genes in citrus. A total of nine plants infected with CTV (3), CLas (3), and healthy (3) were used to select a composed sample of eight leaves/plant. An in-house protocol was developed and optimized in all its stages, varying the concentration of reagents, primers, and reaction template. Extraction of total RNA with 2% CTAB was in the range of 200-1000 ng µL-1. The reverse transcription produced on average 1069 ng µL-1 cDNA. The reference gene products GAPDH, ACTINA, and F-BOX exhibited melting curves without dimer products, Ct ≤ 28, and reaction efficiencies in the range of 90-110%. In all gene expressions, CTV infected samples had the higher Ct’s (25-27) followed by healthy samples (24-25). However, GAPDH and ACTIN had the most stable gene expression (ln 1/M = 2.83), therefore these genes are proposed for normalization. The RT-qPCR protocol was also specific and efficient for the CDR13 gene, putatively associated with systemic acquired resistance to CLas, which suggest its viability in resistance studies of C. sinensis/C. aurantium in response to CTV and CLas infection |
| Disciplinas: | Agrociencias, Biología |
| Palabras clave: | Virus, Fitopatología, Frutales, Naranja, Citrus sinensis, Expresión génica, Transcriptoma, Actina |
| Keyword: | Phytopathology, Virus, Fruit trees, Orange, Citrus sinensis, Gene expression, Actin, Transcriptome |
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