Optimización de un protocolo de extracción de ADN a partir de sangre bovina hemolizada y coagulada para la detección molecular de Anaplasma spp
Título del documento: Optimización de un protocolo de extracción de ADN a partir de sangre bovina hemolizada y coagulada para la detección molecular de Anaplasma spp
Revista: Revista mexicana de ciencias pecuarias
Base de datos: PERIÓDICA
Número de sistema: 000447495
ISSN: 2007-1124
Autores: 1
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2
1
Instituciones: 1Universidad San Francisco de Quito, Colegio de Ciencias Biológicas y Ambientales, Quito, Pichincha. Ecuador
2Universidad San Francisco de Quito, Colegio de Ciencias de la Salud, Quito, Pichincha. Ecuador
Año:
Periodo: Abr-Jun
Volumen: 12
Número: 2
Paginación: 653-664
País: México
Idioma: Español
Tipo de documento: Nota breve o noticia
Enfoque: Experimental, analítico
Resumen en español La anaplasmosis es una enfermedad que puede afectar de manera significativa a la producción en el sector pecuario. Para la detección molecular por PCR de Anaplasma spp., se requiere de una extracción eficiente de ADN a partir de sangre completa, lo que a su vez depende de la calidad de la muestra de sangre. Fallas en los procedimientos de muestreo o conservación de las muestras pueden ocasionar hemolisis y coagulación de la sangre, lo que a su vez puede obstaculizar el diagnóstico. El objetivo de esta investigación fue optimizar un protocolo casero de bajo costo que utiliza resina de Chelex® 100 y permite detectar de manera eficiente a Anaplasma spp. en 30 muestras de sangre bovina hemolizada y coagulada. La eficiencia del protocolo optimizado se comparó con dos kits comerciales de extracción de ADN mostrando una alta concordancia (Kappa de Cohen = 0.72) en la detección molecular de Anaplasma spp. por PCR. Se recomienda esta metodología para superar las limitaciones de investigación que pueden surgir al extraer ADN a partir de muestras de sangre complejas
Resumen en inglés Anaplasma spp. bacteria cause anaplasmosis, a disease which negatively affects livestock production worldwide. Molecular detection by PCR requires efficient extraction of DNA from whole blood, which in turn depends on blood sample quality. Failures in sampling procedures and/or sample storage can lead to hemolysis and blood clotting, which can hamper diagnosis. An established DNA extraction protocol using Chelex® 100 resin was modified to optimize detection of Anaplasma spp. in hemolyzed and coagulated bovine blood samples, as well as reduce its cost. The optimized protocol extracted highly pure DNA effective in PCR analysis. Efficiency of the optimized protocol was compared with two commercial DNA extraction kits. When used in PCR detection of Anaplasma spp., the concordance values for all three were high (Cohen’s Kappa = 0.72). The optimized protocol is effective at extracting DNA from complex blood samples and is much less costly than commercial methods, a clear advantage when operating under limited budgets
Disciplinas: Medicina veterinaria y zootecnia,
Biología
Palabras clave: Bovinos,
Bacterias,
Anaplasma,
Anaplasmosis,
Biología molecular,
Extracción de ADN,
Sangre
Keyword: Bovines,
Bacteria,
Anaplasma,
Anaplasmosis,
Molecular biology,
DNA extraction,
Blood
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