| Revista: | Revista colombiana de biotecnología |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000363189 |
| ISSN: | 0123-3475 |
| Autores: | Osorio Cadavid, Esteban1 Ramírez, Mauricio1 López, William Andrés1 Mambuscay, Luz Adriana1 |
| Instituciones: | 1Universidad del Valle, Departamento de Biología, Cali, Valle del Cauca. Colombia |
| Año: | 2009 |
| Periodo: | Jul |
| Volumen: | 11 |
| Número: | 1 |
| Paginación: | 125-131 |
| País: | Colombia |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, aplicado |
| Resumen en español | Se estandarizó un protocolo rápido, sencillo y de bajo costo para la extracción de ADN genómico de levaduras a partir de lisis de la pared celular mediante tratamiento enzimático y precipitación por alcoholes. El empleo de la enzima Beta-glucoronidasa en reemplazo de la enzima Zimolasa, permitió obtener ADN en alta concentración (124,9±30,2 ng/μl) y de buena calidad (A260/A280 nm = 1,86±0,1), ideal para su uso en estudios de biología molecular. Además, se adicionó un paso de incubación del ADN obtenido a 100° C para inactivar ADNasas. La calidad del ADN obtenido fue evaluada por medio de la amplificación de la región ITS1-5.8S-ITS2, presentando bandas definidas y cuantificables (entre 380 y 880 pb) ideales para estudios de identificación molecular y filogenia |
| Resumen en inglés | A quick, simple and low-cost protocol for extracting genomic DNA from yeast by cell wall lysis involving enzymatic treatment and alcoholic precipitation was standardised. Higher DNA yields (124.9±30.2 ng/μl) were obtained by using beta-glucuronidase instead of zymolyase; these had very high quality (A260/A280 nm = 1.86±0.1) and would be suitable for use in molecular biology assays. Moreover, a DNAse inactivation step was also introduced by incubation at 100 °C to further ensure DNA stability. DNA quality was assayed by PCR amplification of the ITS1-5.8S-ITS2 region, revealing defined, quantifiable 380 to 880 bp bands. These results show that the protocol is ideal for molecular identification and phylogenetic studies |
| Disciplinas: | Química, Biología |
| Palabras clave: | Bioquímica, ADN, Levaduras, Extracción química |
| Keyword: | Chemistry, Biology, Biochemistry, Yeasts, DNA, Chemical extraction |
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