| Revista: | Neumología y cirugía de tórax |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000335755 |
| ISSN: | 0028-3746 |
| Autores: | Bobadilla, Karen1 Hernández-Sánchez, Fernando1 González Hernández, Yolanda1 Torres Rojas, Martha1 |
| Instituciones: | 1Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, Departamento de Investigación en Microbiología, México, Distrito Federal. México |
| Año: | 2010 |
| Periodo: | Jul-Sep |
| Volumen: | 69 |
| Número: | 3 |
| Paginación: | 151-156 |
| País: | México |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Caso clínico, analítico |
| Resumen en español | Antecedentes: Desde hace más de 40 años, tanto la centrifugación diferencial como la centrifugación por gradiente de densidad son utilizadas para el aislamiento de organelos subcelulares. Sin embargo, en estas técnicas no siempre se conservan las propiedades biológicas de los organelos, por lo tanto, es necesario realizar modificaciones técnicas que permitan aislar organelos conservando sus propiedades biológicas. Metodología: Se obtuvieron monocitos derivados a macrófagos a partir de 180 mL de sangre periférica de voluntarios sanos. Los macrófagos se infectaron con Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis), homogenizaron mecánicamente y ultracentrifugaron utilizando un gradiente de Percoll al 27%. Posteriormente, el homogenizado se fraccionó manualmente de acuerdo con su densidad en 30 fracciones. Resultados: Los organelos fueron separados de acuerdo con su densidad. La membrana plasmática con una densidad de 1.040 g/mL se localizó en las fracciones 10-14. Los fagosomas y fagolisosomas con una densidad de 1.109 g/mL se localizaron en las fracciones 22-29. La caracterización de los organelos subcelulares fue realizada mediante métodos fluorométricos específicos por la identificación de acoplamiento de biotina (membrana plasmática), identificación de fracciones conteniendo M. tuberculosis y de la enzima fagolisosomal b-hexosaminidasa. Conclusiones: La técnica de ultracentrifugación en combinación con técnicas enzimáticas es útil para aislar y caracterizar fagosomas, fagolisosomas y membrana plasmática. Estos organelos están involucrados en el procesamiento y presentación de antígenos, su aislamiento es crucial para el estudio de su papel en la respuesta inmune |
| Resumen en inglés | Background: For over 40 years the differential centrifugation and centrifugation by density gradient have been used for the isolation of subcellular organelles. However, these techniques do not always are preserved the biological properties of the organelles therefore is necessary to make technical changes to isolate organelles conserving its biological properties. Methodology: We obtained derived monocytes to macrophages from 180 mL peripheral blood of healthy volunteers. Macrophages infected with Mycobacterium tuberculosis, homogenization mechanically and centrifuge using Percoll gradient to 27%. Subsequently, the homogenized was fractioned manually according to their density in 30 fractions. Results: The organelles were separated according to their density. The plasma membrane with a density of 1,040 g/mL was localized in 10-14 fractions. Phagosomes and phagolysosomes with a density of 1,109 g/mL were found in 22-29 fractions. Characterization of subcellular organelles was performed by fluorometric methods for identifying specific, biotin coupling (plasma membrane), fractions containing the identification of Mycobacterium tuberculosis and fagolisosomal enzyme b-hexosaminidase. Conclusions: The technique of ultracentrifugation in combination with enzymatic techniques useful to isolate and characterize phagosomes, phagolysosomes and plasma membrane. These organelles are involved in the processing and presentation of antigens and their isolation is crucial to study its role in the immune response |
| Disciplinas: | Medicina |
| Palabras clave: | Neumología, Macrófagos, Organelos, Mycobacterium tuberculosis, Fracciones subcelulares, Gradiente de Percoll |
| Keyword: | Medicine, Pneumology, Macrophages, Organelles, Mycobacterium tuberculosis, Subcellular fractions, Percoll gradient |
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