Protocolo da extracao de DNA de material parafinado para analise de microssatelites em leiomioma



Título del documento: Protocolo da extracao de DNA de material parafinado para analise de microssatelites em leiomioma
Revista: Jornal brasileiro de patologia e medicina laboratorial
Base de datos: PERIÓDICA
Número de sistema: 000297076
ISSN: 1676-2444
Autores: 1


2
Instituciones: 1Universidade de Sao Paulo, Faculdade de Medicina, Sao Paulo. Brasil
2Hospital das Clinicas de Sao Paulo, Servico de Ginecologia e Obstetricia, Sao Paulo. Brasil
Año:
Periodo: Jul-Sep
Volumen: 39
Número: 3
Paginación: 253-255
País: Brasil
Idioma: Portugués
Tipo de documento: Artículo
Enfoque: Aplicado, descriptivo
Resumen en inglés The standardization of the protocol of the DNA extraction from paraffin material in order to analyze the instability of microsatellites in genes related to the uterine leiomyoma, using 30 to 40mg of tissue removed from paraffin blocks is presented. Desparaffin throught xilol baths to 65ºC, rehydrated with solutions of decreasing concentrations of ETOH and deionisation water. The extraction of DNA was obtained through the stages of cellular lysis, with Promega solution, digestion of proteins by Proteinase K, precipitation proteins with Promega solution and precipitation of DNA with ETOH 70% colded and ressuspended with Promega solution. This protocol results in a viable DNA to be use in the Polimerase Chain Reaction (PCR)
Resumen en portugués É apresentada a padronização de protocolo de extração de DNA de material parafinado para análise da instabilidade de microssatélites de genes relacionados ao leiomioma uterino, utilizando-se 30mg a 40mg de tecido retirado de blocos de parafina. Os blocos são desparafinizados por banhos de xilol a 65ºC, reidratados com soluções de concentrações decrescentes de ETOH e água deionizada. A extração de DNA é obtida através das etapas de lise celular, com solução Promega, digestão de proteínas por proteinase K, precipitação com proteínas com solução Promega e precipitação do DNA com ETOH 70% gelado e ressuspendido com solução Promega. Este protocolo resulta em um DNA viável para uso na reação em cadeia da polimerase (PCR)
Disciplinas: Medicina
Palabras clave: Ginecología y obstetricia,
Oncología,
Leiomioma,
Utero,
Parafina,
Microsatélites,
ADN,
Extracción
Keyword: Medicine,
Gynecology and obstetrics,
Oncology,
Leiomyoma,
Uterus,
Paraffin,
Microsatellites,
DNA,
Extraction
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