| Revista: | Interciencia |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000442315 |
| ISSN: | 0378-1844 |
| Autores: | Torres garcía, Ana Karen Burrola Barraza, M. Eduviges1 Castro Valenzuela, Beatriz E1 Grado Ahuir, Juan Alberto1 |
| Instituciones: | 1Universidad Autónoma de Chihuahua, Facultad de Zootecnia y Ecología, Chihuahua. México |
| Año: | 2019 |
| Volumen: | 44 |
| Número: | 1 |
| Paginación: | 43-47 |
| País: | Venezuela |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Analítico, descriptivo |
| Resumen en español | La activación del genoma embrionario implica la degradación masiva de los RNAm maternos almacenados durante la ovogénesis por acción de miRNAs. DICER es la ribonucleasa encargada de procesar miRNAs para que sean capaces de reconocer el 3’UTR de un RNAm y bloquear su traducción. En bovinos la expresión del gen Dicer tiene el comportamieto de un RNAm materno. El objetivo del presente estudio fue demostrar que el RNAm de Dicer es regulado por un miRNA. Mediante un análisis bioinformático se identificó la región completa del 3’UTR de Dicer bovino y a través del programa miRmap se encontró que el miRNA bta-miR-19a tenie sitios de unión con este 3’UTR. Posteriormente se transfectó un cultivo de células de la granulosa bovina con diferentes concentraciones del bta-miR-19a (10, 30 y 50nM) por 5h; el cultivo celular se mantuvo durante 48h más. Se extrajo el RNA total y se sintetizó el cDNA para medir la expresión del gen Dicer por PCR cuantitativa y de la proteína DICER por western blot con un anticuerpo específico. Los resultados indicaron que no hubo diferencias en el nivel de expresión del RNAm (P>0,05) entre las diferentes concentraciones del bta-miR-19a; sin embargo, por western blot se demostró disminución de la proteína DICER (P<0,05) en células transfectadas con 50mM de bta-miR19a. Estos resultados demuestran que el bta-miR-19a inhibe la traducción del RNAm del gen Dicer, lo que implica que siendo DICER quien genera los miRNAs, es ella misma quien promueve su propia regulación a nivel genómico |
| Resumen en inglés | Embryonic genome activation implies a massive degradation of maternal mRNAs stored during oogenesis, through miRNAs. DICER is a ribonuclease responsible for processing miRNAs by recognition of 3’UTR mRNA and blockade of its translation. Dicer gene expression has a maternal mRNA function. The goal of the present work was to show that Dicer mRNA is regulated by a miRNA. The complete region of the bovine Dicer 3’UTR was identified by means of bioinformatic tools and, with the miRmap program, it was found that bta-miR19a has binding sites to this 3’UTR. Subsequently, transfection was performed for 5h with different concentrations (10, 30 y 50nM) of bta-miR-19a in a culture of bovine granulosa cells; the cell culture was maintained for 48h more. Total RNA was isolated and cDNA was synthetized to quantify the Dicer gene expression by Real Time PCR and the DICER protein by western blot assay with a specific antibody. Results indicated that there were no differences in the level of gene expression (P>0.05) between the different concentrations of bta-miR-19a. However, western blot showed a decrease of DICER protein (P<0.05) in transfected cells with 50mM bta-miR-19a. This demonstrates that bta-miR-19a inhibits the translation of the RNAm of the Dicer gene, which implies that, as DICER generates the miRNAs, it promotes its own regulation at a genomic level |
| Resumen en portugués | A ativação do genoma embrionário implica a degradação massiva dos RNAm maternos armazenados durante a ovogênese por ação de miRNAs. DICER é a ribonuclease encarregada de processar miRNAs para serem capazes de reconhecer o 3’UTR de um RNAm e bloquear sua tradução. Em bovinos a expressão do gene Dicer tem comportamento de um RNAm materno. O objetivo do presente estudo foi demonstrar que o RNAm de Dicer é regulado por um miRNA. Mediante uma análise bioinformática foi identificada a região completa do 3’UTR de Dicer bovino e através do programa miRmap foi observado que o miRNA bta-miR-19a tem pontos de união com este 3’UTR. Posteriormente foi transfectada uma cultura de células da granulosa bovina com diferentes concentrações do bta-miR-19a (10, 30 e 50nM) por 5h; a cultura celular foi mantida por mais 48h. O RNA total foi extraído e o cDNA foi sintetizado para medir a expressão do gene Dicer por PCR quantitativa e da proteína DICER por western blot com anticorpo específico. Os resultados indicaram que não houve diferenças no nível de expressão do RNAm (P>0,05) entre as diferentes concentrações do bta-miR-19a; no entanto, por western blot ficou demonstrada a diminuição da proteína DICER (P<0,05) em células transfectadas com 50mM de bta-miR-19a. Estes resultados demonstram que o bta-miR-19a inibe a tradução do RNAm do gene Dicer, o qual implica que, sendo DICER aquele que gera os miRNAs, é também quem promove sua própria regulação em nível genômico |
| Disciplinas: | Medicina veterinaria y zootecnia |
| Palabras clave: | Bovinos, Reproducción y genética animal, Genoma embrionario, Activación génica, ARN mitocondrial, Expresión génica, Gen Dicer |
| Keyword: | Bovines, Animal reproduction and genetics, Embryo genome, Gene activation, Mitochondrial RNA, Gene expression, Gene Dicer |
| Texto completo: | https://www.interciencia.net/wp-content/uploads/2019/01/43-BURROLA-44-01.pdf |
