Estandarización de un protocolo para la cuantificación de ácido abscísico mediante la técnica de ELISA competitivo



Título del documento: Estandarización de un protocolo para la cuantificación de ácido abscísico mediante la técnica de ELISA competitivo
Revista: Ecología aplicada
Base de datos: PERIÓDICA
Número de sistema: 000406953
ISSN: 1726-2216
Autores: 1
1
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Instituciones: 1Centro Internacional de la Papa, Lima. Perú
Año:
Periodo: Ene-Jul
Volumen: 16
Número: 1
Paginación: 9-13
País: Perú
Idioma: Español
Tipo de documento: Artículo
Enfoque: Analítico, descriptivo
Resumen en español La respuesta fisiológica más resaltante de las plan tas frente al estrés hídrico por sequía es la síntesis de la fitohormona Acido abscísico (ABA). U na solución a los cambios ambientales es lograr un mejor uso eficiente de agua, por ello la predicc ión en la magnitud de la señalización de ABA puede tener gran importancia en la agroecología; ad emás, permitirá la optimización de las técnicas de riego en zonas áridas que necesitan de cultivos que limiten el uso de éste recurso natural. Hasta el momento, la metodología más específica y confiab le para su cuantificación es el Ensayo de Inmuno-absorbancia Ligado a Enzimas (ELISA por sus siglas en inglés) del tipo competitivo indirecto. Es por esta razón que el presente estudi o utilizó esta técnica con la finalidad de establec er un protocolo reproducible y accesible que permita d eterminar concentraciones de ABA. La metodología consistió en evaluar diferentes concent raciones de los anticuerpos y antígeno, así como del sustrato; siendo las condiciones óptimas que pe rmitieron obtener la mejor sensibilidad y reproducibilidad del protocolo las especificadas a continuación: cobertura con el conjugado ABA- BSA 300 ng/ml, MAC 252 (anticuerpo monoclonal espec ífico para ABA) a 1:80 000, Antirat IgG a 1:2 000 y sustrato PNPP en 1 mg/ml. Obteniéndose al final ecuaciones lineales cuyos valores de R 2 se presentaron en un rango de 0.95-0.99 así como di ferencias significativas entre los controles positivos y negativos
Resumen en inglés The most highlighted physiological response of plan ts to water stress by drought is the synthesis of the plant hormone Abscisic Acid (ABA). A solutio n to environmental changes is to achieve a better efficient use of water. For this reason, pre dicting the magnitude of ABA signaling may have considerable importance in agroecology; in addition , will allow the optimization of irrigation techniques in arid zones that need crops that limit the use of this natural resource. The most specifi c and reliable methodology for quantification of the enzyme is the indirect competitive type Enzyme- Linked Immunosorbent Assay (ELISA). For this reason the present study used this technique in order to establish a reproducible and accessible pr otocol that determines concentrations of ABA. The methodology included the evaluation of differen t antibodies, antigen and media concentrations. Results show that optimal conditions that allowed t he highest sensitivity and reproducibility are: converage ABA-BSA conjugate 300 ng / ml, MAC 252 (m onoclonal antibody specific for ABA) to 1:80 000, antirat IgG 1: 2000 and PNPP substrate in 1 mg / ml. Linear equations obtained gave R2 values in a range of 0.95-0.99 as well as signific ant differences between the positive and negative controls
Disciplinas: Química,
Biología
Palabras clave: Fitoquímica,
Fisiología vegetal,
Acido abscísico,
ELISA,
Estrés hídrico,
Protocolos,
Agroecología
Keyword: Chemistry,
Biology,
Phytochemistry,
Plant physiology,
Abscisic acid,
ELISA,
Water stress,
Protocols,
Agroecology
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