| Revista: | Bioquimia |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000319004 |
| ISSN: | 0185-5751 |
| Autores: | Pérez López, Lilián1 Hernández Pérez, Liliana Melchor Rodríguez, Antonio Zulueta Rodríguez, Orlando López Cisnero, Raquel |
| Instituciones: | 1Centro de Inmunoensayo, División de Inmunoquímica, La Habana. Cuba |
| Año: | 2008 |
| Periodo: | Oct-Dic |
| Volumen: | 33 |
| Número: | 4 |
| Paginación: | 137-146 |
| País: | México |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, aplicado |
| Resumen en español | En este trabajo se describe un procedimiento de purificación de TSH humana (hTSH) a partir de glándulas hipofisiarias mediante cromatografía de inmunoafinidad, empleando un anticuerpo policlonal específico contra la cadena beta de la hormona. Las glándulas se secaron con acetona y se pulverizaron empleando un molino. La extracción de TSH se realizó con la mezcla acetato de amonio:etanol. El extracto resultante se precipitó con etanol al 87% (v/v). El precipitado obtenido se resuspendió con éter dietílico y se dejó secar por evaporación. El polvo fue resuspendido en solución salinafosfato pH 7.4, clarificado y aplicado a una columna empaquetada con Sepharose-IgG de carnero anti βTSH. La elución de la hormona se realizó con glicina 0.2 mol/L pH 2.8. La TSH obtenida se liofilizó y se conservó a -20 °C. La pureza se evaluó mediante PAGE-SDS tomando como referencia TSH comercial. La TSH purificada mostró una masa molecular de 54.1 kDa y una pureza de 93.87%. La caracterización de las subunidades se realizó mediante PAGE-SDS desnaturalizante, obteniéndose dos bandas correspondientes a las subunidades α y β, con masas moleculares de 16.8 kDa y 20.2 kDa, respectivamente. El rendimiento y el grado de purificación fueron 43.7 y 41.7%, respectivamente. La actividad específica de la TSH purificada fue de 21.1 UI/mg. El procedimiento de purificación diseñado es sencillo, reproducible y permite obtener la hormona con características fisicoquímicas y biológicas similares a la hormona comercial, indicada para su uso como inmunógeno o estándar de calibración |
| Resumen en inglés | A simple method is describe for the efficient purification of human thyrotropin from pituitary glands by immunoaffinity chromatography, using a policlonal antibody anti βTSH. The glands were dried with acetone, and a powder of pituitary glands was obtained using a mill. The extraction operation was performed with a mixture of ammonium acetate:ethanol. The obtained extract was precipitated with 87% (v/v) ethanol. The pellet was recovered by centrifugation, suspended in diethyl ether and finally dried by evaporation. The resultant powder was resuspended in salinephosphate buffer pH 7.4, clarified and applied to a column packed with goat IgG anti βTSH-Sepharose 4B. The TSH fraction was eluted with 0.2 mol/L glycine pH 2.8, lyophilized and stored at -20 °C. The purity was analyzed by SDS-PAGE using commercial TSH as control. Purified TSH showed a molecular mass of 54.1 kDa and a purity of 93.87%. Subunit characterization was carried out by SDSPAGE under reducing conditions. Dissociated TSH migrated as two bands, corresponding to α and β chains, with a molecular mass of 16.8 kDa and 20.2 kDa, respectively. The recovery of TSH by this procedure was 43.7%, and a purification factor of 41.7% was reached. The specific activity obtained was 21.1 UI/mg. These results indicate that immunoaffinity purification of TSH by means of this polyclonal antibody is a simple one-step procedure, which is reproducible and allows obtaining a hormone with physical-chemical characteristics, and a biological activity very similar to the commercial one. This hormone is appropriate for use as immunogens or immunoassay calibrators |
| Disciplinas: | Química |
| Palabras clave: | Bioquímica, Inmunología, Tirotropina humana, Purificación química, Cromatografía de afinidad, Inmunodiagnóstico |
| Keyword: | Chemistry, Biochemistry, Human thyrotropin, Chemical purification, Affinity chromatography, Immunodiagnosis, Immunology |
| Texto completo: | Texto completo (Ver HTML) |
