| Revista: | The biologist |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000389806 |
| ISSN: | 1994-9073 |
| Autores: | Arias, Luis1 López, G. Myriam1 Marcelo, Alvaro1 |
| Instituciones: | 1Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Centro de Investigación de Bioquímica y Nutrición “Alberto Guzmán Barrón”, Lima. Perú |
| Año: | 2015 |
| Periodo: | Jul-Dic |
| Volumen: | 13 |
| Número: | 2 |
| Paginación: | 359-366 |
| País: | Perú |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Analítico, descriptivo |
| Resumen en español | El presente trabajo tuvo como objetivo aislar la proteinasa de 28KDa a partir del parásito Fasciola hepatica (Linnaeus, 1758). Esta cisteinil proteasa fue purificada por protocolos clásicos tales como la precipitación con sulfato de amonio, cromatografía de exclusión molecular G-25, G-75, cromatografía de afinidad tiol sefarosa 4B y electroforesis SDS-PAGE al 12 %, siendo monitoreada la actividad enzimática en cada etapa de la purificación. La cisteinil proteinasa se observó como una banda homogénea y pura en el gel SDS-PAGE, la cual tiene una recuperación -1 -1 de 12,7%, 337,500 umol min mg de actividad específica y un número de 260 veces de purificación de la enzima respecto del extracto crudo. Mediante este esquema se purificó la catepsina L de 28 KDA a partir del regurgitado de una manera efectiva comparado con otras - alternativas. La cantidad de proteína obtenida fue de 0,032 mg·mL ¹. La enzima migró como una banda homogénea durante la electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS-PAGE al 12,5%, y el peso molecular determinado fue de aproximadamente 28 Kda de acuerdo a su movilidad relativa |
| Resumen en inglés | This work aims to isolate the 28KDa proteinase from the parasite Fasciola hepatica (Linnaeus, 1758). This cysteinyl protease was purified by classical methods such as the ammonium sulphate precipitation, G-25 and G-75 gel filtration chromatographies, affinity chromatography with thiol sepharose 4B and SDS-PAGE 12% electrophoresis. The enzymatic activity of Cathepsin L was monitored in each step of purification using a specific substrate. The cysteine proteinase was observed as a pure and homogenous band in the SDS-PAGE gel. The recovery percentage was -1 -1 12.7%, with a specific activity of 337,500 umol, min mg and a purification factor of the enzyme of 260. Using this simple scheme of purification we purified to homogeneity the cathepsin L of 28KDa from the regurgitate in an effective way compared with other alternative methods. The - amount of protein obtained was 0.032 mg·mL ¹. The enzyme showed as a homogenous band during the electrophoresis in polyacrylamide gel with 12.5% SDS-PAGE and the molecular weight was 28 kDa according to its relative mobility |
| Disciplinas: | Medicina, Química |
| Palabras clave: | Bioquímica, Parasitología, Purificación bioquímica, Catepsina L, Electroforesis, Cromatografía, Proteinasas, Fasciola hepatica |
| Keyword: | Medicine, Chemistry, Biochemistry, Parasitology, Biochemical purification, Cathepsin L, Electrophoresis, Chromatography, Proteinases, Fasciola hepatica |
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