Transformación de hongos fitopatógenos Sclerotium cepivorum Berk mediante fusión de protoplastos
Título del documento: Transformación de hongos fitopatógenos Sclerotium cepivorum Berk mediante fusión de protoplastos
Revista: Revista mexicana de ciencias agrícolas
Base de datos: PERIÓDICA
Número de sistema: 000362215
ISSN: 2007-0934
Autors: 1
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Institucions: 1Instituto Tecnológico de Celaya, Departamento de Ingeniería Bioquímica, Celaya, Guanajuato. México
2Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, Unidad de Biotecnología del Bajío, Celaya, Guanajuato. México
3Universidad Autónoma de Querétaro, Facultad de Ingeniería, Querétaro. México
Any:
Període: Sep-Oct
Volum: 3
Número: 7
Paginació: 1333-1345
País: México
Idioma: Español, inglés
Tipo de documento: Artículo
Enfoque: Experimental, analítico
Resumen en español La pudrición blanca, una de las enfermedades más preocupantes para los productores de ajo (Allium sativum), es causada por el hongo fitopatógeno Sclerotium cepivorum Berk. Con el fin de desarrollar procedimientos de biología molecular para el hongo, en este trabajo se describe un método de transformación empleando fusión de protoplastos en presencia de polietilenglicol 3350 (PEG). Se empleó el plásmido pAN7-1 que confiere resistencia a higromicina B, el cual contiene el gen higromicina fosfotransferasa B (hph) de Escherichia coli bajo el promotor gliceraldehído fosfato deshidrogenasa (gpdA) y el terminador antranilato sintetasa (trpC) del hongo filamentoso Aspergillus nidulans. Las transformantes recuperadas en el medio de cultivo de regeneración papa dextrosa agar-sorbitol (PDA-S) en presencia de 200 (μmL-1 de higromicina B se analizaron amplificando un fragmento del gen bacteriano hph mediante PCR con oligonucleótidos específicos: Hig 1, Sentido 5' GAC CTG CTG AGG TCC CTC 3' y Hig 2, antisentido 5' GCC CTC GGA CGA GTG CTG 3'. Se obtuvieron frecuencias de 12-18 transformantes de S. cepivorum por μg de ADN vector. Los resultados descritos en el presente trabajo contribuirán en la caracterización molecular de genes involucrados en el fenómeno de patogénesis de S. cepivorum sobre el ajo
Resumen en inglés White rot, a disease of most concern to the producers of garlic (Allium sativum), is caused by the phytopathogenic fungus Sclerotium cepivorum Berk. In order to develop procedures of molecular biology to the fungus, in this paper we describe a transformation method using fusion of protoplasts in the presence of polyethylene glycol 3350 (PEG). We used the plasmid pAN7-1 which confers resistance to hygromycin B, which contains the hygromycin phosphotransferase gene B (hph) from Escherichia coli under the glyceraldehyde phosphate dehydrogenase promoter (GPDA) and the anthranilate synthase terminator (trpC) of the filamentous fungus Aspergillus nidulans. The recovered transformants in the regeneration medium potato dextrose agar-sorbitol (PDA-S) in the presence of 200 μgmL-1 of hygromycin B were analyzed by amplifying a fragment of the bacterial gene hph by PCR with specific oligonucleotides: Hig 1, Sentido 5' GAC CTG CTG AGG TCC CTC 3' and Hig 2, antisentido 5' GCC CTC GGA CGA GTG CTG 3'. Obtaining 12-18 frequencies of transformants of S. cepivorum per μg of vector DNA. The results described in this paper will contribute to the molecular characterization of the genes involved in the phenomenon of pathogenesis of S. cepivorum on garlic
Disciplines Agrociencias,
Biología
Paraules clau: Fitopatología,
Hortalizas,
Genética,
Hongos,
Ajo,
Allium sativum,
Sclerotium cepivorum,
Protoplastos,
Ingeniería bioquímica,
Biología molecular,
Escherichia coli,
Aspergillus nidulans
Keyword: Agricultural sciences,
Biology,
Phytopathology,
Vegetables,
Fungi,
Genetics,
Garlic,
Allium sativum,
Sclerotium cepivorum,
Protoplasts,
Biochemical engineering,
Molecular biology,
Escherichia coli,
Aspergillus nidulans
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