| Revista: | Revista latinoamericana de química |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000343701 |
| ISSN: | 0370-5943 |
| Autors: | Martínez Hernández, Aída1 Mena Espino, María Esther1 Herrera Estrella, Alfredo H2 Martínez Hernández, Pedro2 |
| Institucions: | 1Colegio de Postgraduados, Laboratorio de Biología Molecular y Análisis Genómico, Champotón, Campeche. México 2Instituto Politécnico Nacional, Centro de Investigación y de Estudios Avanzados, Irapuato, Guanajuato. México |
| Any: | 2010 |
| Volum: | 38 |
| Número: | 1 |
| Paginació: | 21-44 |
| País: | México |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, aplicado |
| Resumen en español | México es el centro de origen y diversificación de los agaves, un cultivo agroindustrial con enorme valor cultural en este país. Los agaves poseen relevantes características biológicas como su gran tolerancia a estrés abiótico, que les permite desarrollarse bajo condiciones ambientales extremas; o su metabolismo secundario, mediante el cual producen moléculas de interés biotecnológico. Sin embargo, las herramientas necesarias para realizar estudios de fisiología molecular, o para determinar las bases moleculares sobre las que subyacen las particulares capacidades metabólicas de los agaves, no han sido desarrolladas. En este trabajo evaluamos la efectividad de métodos comerciales de extracción de ARN total y purificación de ARNm para la construcción de bibliotecas de ADNc a partir de diferentes tejidos de A. tequilana, proceso que describimos en detalle. También reportamos secuencias y métodos para análisis de expresión por RT–PCR de genes de agave importantes para su fisiología como rbcS, codificante de la sub–unidad pequeña de la RuBisCO; el de la enzima málica dependiente de NADP+; de la 1–SST fructosiltransferasa; y un gen de proteínas de estrés abiótico tipo LEA. Los métodos aquí reportados, y las bibliotecas generadas, podrán ser utilizados en estudios de fisiología molecular, genómica funcional, y análisis transcriptómico en agaves |
| Resumen en inglés | Mexico is the center of origin and diversification of agave, a highly valued crop in the agroindustry, as well as in Mexican culture. Agaves present unique biological characteristics, such as their high tolerance to abiotic stress that allows them to grow under extreme environmental conditions, and their secondary metabolism that leads to the production of molecules of biotechnological interest. However, the necessary tools to carry out molecular physiology studies in Agave, and disclose the subjacent molecular basis of their particular metabolic capacity, have not been developed. Here we evaluate the performance of a series of commercially available methods for RNA extraction and mRNA purification that may be suitable for the construction of cDNA libraries derived from different A. tequilana tissues, a process described in detail. In addition, we report sequences and methods for the analysis of gene expression using RT–PCR for physiologically relevant agave genes. Expression of rbcS, encoding the small subunit of the RuBisCO; a gene encoding an NADP+ dependent malic enzyme; a gene encoding 1–SST fructosyltransferase; and a gene coding for a LEA–like abiotic stress related protein of A. tequilana, was analyzed using this methods. The methods set forth herein, and the libraries generated will subsequently be applied to molecular physiology, functional genomics, and transcriptome analysis of agaves |
| Disciplines | Biología, Agrociencias |
| Paraules clau: | Angiospermas, Genética, Bioquímica, Biblioteca genómica, ADN complementario, Expresión génica, ARN mensajero, Agave tequilana, Agavaceae |
| Keyword: | Biology, Agricultural sciences, Angiosperms, Genetics, Biochemistry, Genomic library, Complimentary DNA, Gene expression, Messenger RNA, Agave tequilana, Agavaceae |
| Text complet: | Texto completo (Ver HTML) |
