Immunoblotting analyses using two-dimensional gel electrophoresis of Trypanosoma cruzi excreted-secreted antigens



Título del documento: Immunoblotting analyses using two-dimensional gel electrophoresis of Trypanosoma cruzi excreted-secreted antigens
Revista: Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical
Base de datos: PERIÓDICA
Número de sistema: 000282528
ISSN: 0037-8682
Autors: 1
2


Institucions: 1Universidade Federal de Uberlandia, Instituto de Ciencias Biomedicas, Uberlandia, Minas Gerais. Brasil
2Universidade Federal de Goias, Instituto de Ciencias Biologicas, Goiania, Goias. Brasil
Any:
Període: Nov-Dic
Volum: 37
Número: 6
Paginació: 454-459
País: Brasil
Idioma: Inglés
Tipo de documento: Artículo
Enfoque: Experimental, analítico
Resumen en inglés Trypanosoma cruzi trypomastigotes excrete-secrete a complex mixture of antigenic molecules. This antigenic mixture denominated trypomastigote excreted-secreted antigens contains a 150-160 kDa band that shows excellent performance in Chagas' disease diagnosis by immunoblotting. The present study partially characterized by two-dimensional gel electrophoresis the immunoreactivity against the 150-160kDa protein using sera samples from chagasic patients in different phases of the disease. Trypomastigote excreted-secreted antigen preparations were subjected to high-resolution two-dimensional (2D) gel electrophoresis followed by immunoblotting with sera from chagasic and non-chagasic patients. The 150-160kDa protein presented four isoforms with isoelectric focusing ranging from 6.2 to 6.7. The four isoforms were recognized by IgM from acute phase and IgG from chronic phase sera of chagasic patients. The 150-160kDa isoform with IF of approximately 6.4 became the immunodominant spot with the progression of the disease. No cross-reactivity was observed with non-chagasic or patients infected with Leishmania sp. In this study we provide basic knowledge that supports the validation of trypomastigote excreted-secreted antigens for serological diagnosis of Chagas' disease
Resumen en portugués Formas tripomastigotas de Trypanosoma cruzi excretam/secretam uma complexa mistura de moléculas antigênicas. Essa mistura é chamada trypomastigote excreted-secreted antigens e contém uma banda de massa molecular em torno de 150-160kDa que possui excelente performance para diagnóstico de doença de Chagas em immunoblotting. No presente estudo foi caracterizado parcialmente, por gel bidimensional, a proteína de 150-160kDa pela análise da reatividade de anticorpos de pacientes chagásicos nas diversas fases da doença. Proteínas do trypomastigote excreted-secreted antigens foram separadas por eletroforese de alta resolução em duas dimensões (2D) e submetidas a immunoblotting com soros de pacientes chagásicos e não chagásicos. A proteína de 150-160kDa foi identificada em quatro isoformas com pontos isoelétricos variando entre 6,2 a 6,7. As quatro isoformas foram reconhecidas por anticorpos IgM na fase aguda e por anticorpos IgG na fase crônica da doença de Chagas. A isoforma de 150-160kDa, com ponto isoelétrico de aproximadamente 6,4 tornou-se imunodominante dentre as demais com a progressão da doença. Não foi detectada reatividade cruzada com os soros de pacientes não chagásicos ou pacientes infectados com Leishmania sp. Os dados obtidos nesse trabalho, reforçam a importância da utilização do trypomastigote excreted-secreted antigens para o diagnóstico sorológico da doença de Chagas
Disciplines Biología
Paraules clau: Inmunología,
Parasitología,
Diagnóstico,
Serología,
Tripomastigotes,
Trypanosoma cruzi,
Antígenos,
Electroforesis,
Inmunoprecipitación
Keyword: Biology,
Immunology,
Parasitology,
Antigens,
Electrophoresis,
Immunoblotting,
Trypanosoma cruzi,
Trypomastigotes,
Serology,
Diagnosis
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