| Revista: | Revista ciencia agronomica |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000324491 |
| Autors: | Rodrigues, Jose Arievilo Gurgel1 Vanderlei, Edfranck de Sousa Oliveira1 Queiroz, Ismael Nilo Lino de Quindere, Ana Luiza Gomes1 Benevides, Norma Maria Barros1 |
| Institucions: | 1Universidade Federal do Ceara, Centro de Ciencias, Fortaleza, Ceara. Brasil |
| Any: | 2009 |
| Període: | Jul-Sep |
| Volum: | 40 |
| Número: | 3 |
| Paginació: | 381-387 |
| País: | Brasil |
| Idioma: | Portugués |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, aplicado |
| Resumen en inglés | Biochemical investigations are important tools for discovery of new anticoagulant agents present in a variety of aquatic organisms to substitute for the traditional use of heparin (HEP) in the medical clinic. The aim of this study was to purify and evaluate the anticoagulant activity of glycosaminoglycans (GAGs) isolated from the skin of the common carp Cyprinus carpio. GAGs were extracted with crude papain in 0.1 sodium acetate buffer (pH 5.0) containing 5 mM cysteine and 5 mM EDTA, followed by ion exchange chromatography on DEAE-cellulose column where five fractions were eluted (F I; F II; F III; F IV e F V) using a NaCl gradient. The fractions were concentrated by lyophilization and submitted to 0.5% agarose gel electrophoresis. The anticoagulant activity was evaluated by the activated partial thromboplastin time (APTT) using normal human plasma and expressed in international units per mg of polysaccharide using standard HEP (193 IU mg-1). The methodology was efficient in the extraction and fractionation of GAGs, and the preliminary identification by electrophoresis suggested molecules of dermatan sulfate and preponderance of heparan sulfate. The anticoagulant activity expressed as dosedependence manner, however resulting in a maximum of 4.89 IU mg-1 compared to heparin. Therefore, the use of specific degradation enzymes to characterization of heparinoid obtained from the proteolytic digestion in isolation of GAGs presented in the skin of C. carpio suggests posterior studies. The employment of technique with other cultivated species will be also indicated |
| Resumen en portugués | Investigações bioquímicas são ferramentas importantes para a descoberta de novos agentes anticoagulantes presentes em uma grande variedade de organismos aquáticos e para uso em substituição à tradicional da heparina (HEP) na clínica médica. Objetivou-se purificar e avaliar a atividade anticoagulante dos glicosaminoglicanos (GAGs) isolados da pele da carpa comum Cyprinus carpio. Os GAGs foram extraídos com o uso de papaína bruta em tampão acetato de sódio 0,1 M (pH 5,0) contendo cisteína 5 mM e EDTA 5 mM, seguido por cromatografia de troca iônica em coluna de DEAE-celulose, na qual foram eluídas cinco frações (FI; FII; FIII; FIV e FV), utilizando um gradiente de NaCl. As frações foram concentradas por liofilização e submetidas à eletroforese em gel de agarose 0,5%. A atividade anticoagulante foi avaliada através do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), usando plasma humano normal e expressa em unidades internacionais por mg de polissacarídeo, utilizando HEP padrão (193 UI mg-1). A metodologia foi eficiente na extração e fracionamento dos GAGs, revelando, por eletroforese, a identificação preliminar de moléculas de dermatam sulfato e a preponderância de heparam sulfato. A atividade anticoagulante expressou-se dose-dependente, no entanto resultando em, no máximo, 4,89 UI mg-1 em relação à HEP. Portanto, o emprego da digestão proteolítica no isolamento de GAGs presentes na pele de C. carpio sugere posteriores estudos quanto à caracterização do heparinóide, com a utilização de enzimas de degradação específicas. Estudos da técnica com outras espécies cultivadas também seriam indicados |
| Disciplines | Biología, Química |
| Paraules clau: | Fisiología animal, Peces, Bioquímica, Glucosaminoglucanos sulfatados, Anticoagulantes, Purificación química, Cyprinus carpio |
| Keyword: | Biology, Chemistry, Animal physiology, Fish, Biochemistry, Sulfated glycosaminoglycans, Anticoagulants, Chemical purification, Cyprinus carpio |
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