| Revista: | Revista brasileira de botanica |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000278728 |
| ISSN: | 0100-8404 |
| Autors: | Eneas-Filho, Joaquim1 Suderio, Fabricio Bonfim2 Gomes-Filho, Eneas Prisco, Jose Tarquinio |
| Institucions: | 1Universidade Federal do Ceara, Centro de Ciencias, Fortaleza, Ceara. Brasil 2Universidade Federal do Ceara, Departamento de Bioquimica e Biologia Molecular, Fortaleza, Ceara. Brasil |
| Any: | 2000 |
| Període: | Mar |
| Volum: | 23 |
| Número: | 1 |
| Paginació: | 69-76 |
| País: | Brasil |
| Idioma: | Inglés |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental |
| Resumen en inglés | Cotyledonary b-galactosidases were isolated and partially purified from Pitiúba cowpea (Vigna unguiculata (L.) Walp.) quiescent seeds. The purification steps consisted of precipitation of the crude extract with ammonium sulphate in the range of 20-60% saturation, acid precipitation, DEAE-Sephadex ion-exchange chromatography and Lactosyl-Sepharose affinity chromatography. This purification process gave rise to three b-galactosidases-rich fractions: b-gal I, b-gal II and b-gal III, which were purified about 5, 509, and 62 fold, respectively. They reached maximal enzyme activity at different pH ranges: 3.5-4.5 for b-gal I, 3.0-3.5 for b-gal II, and 3.0-4.0 for b-gal III. Their maximal activities were reached when the temperature of the assay medium was 60° C, and preincubation of the enzymes at different temperatures has shown that they were heat-stable up to 50° C. There were no significant differences among the partially purified enzymes as far as their response to the different effectors tested, except for Mn2+ and EDTA, which affected differently b-gal I, b-gal II, and b-gal III. They were slightly affected by Mg2+, Ca2+, Zn2+, Co2+, tartarate, molybdate, glucose, and lactose, strongly inhibited by Cu2+ and galactose, and inactivated by Hg2+. These chemical and physical properties are similar to the ones found for other plant b-galactosidases. Although through this process of purification three isoforms of this enzyme were obtained, isoelectric focusing in polyacrylamide slab gel of these enzyme-proteins suggest that cotyledons of |
| Resumen en portugués | b-galactosidases cotiledonárias foram isoladas e purificadas, parcialmente, de sementes quiescentes de feijão-de-corda (Vigna unguiculata (L.) Walp.) Pitiúba. As etapas de purificação consistiram de precipitação do extrato bruto com sulfato de amônio na faixa de 20-60% de saturação, precipitação ácida, cromatografia de troca-iônica em DEAE-Sephadex e cromatografia de afinidade em Lactosil- Sepharose. Esse processo de purificação deu origem a três frações ricas em b-galactosidases: b-gal I, b-gal II e b-gal III, as quais foram purificadas cerca de 5, 509 e 62 vezes, respectivamente. Elas atingiram máxima atividade enzimática em diferentes faixas de pH: 3,5-4,5 para b-gal I, 3,0-3,5 para b-gal II e 3,0-4,0 para b-gal III. Suas atividades máximas foram alcançadas quando a temperatura do meio de ensaio era 60° C, e a preincubação das enzimas em diferentes temperaturas mostrou que elas eram termoestáveis até 50° C. Não houve diferenças significativas entre as enzimas parcialmente purificadas no que respeita à resposta dos diferentes efetores testados, exceto para Mn2+ e EDTA, que afetaram, diferentemente, b-gal I, b-gal II e b-gal III. Elas foram ligeiramente afetadas por Mg2+, Ca2+, Zn2+, Co2+, tartarato, molibdato, glicose e lactose, fortemente inibidas por Cu2+ e galactose, e inativadas por Hg2+. Essas propriedades químicas e físicas são semelhantes às encontradas para outras b-galactosidases de plantas. Embora, três isoformas dessa enzima tenham sido obtidas através desse processo de purificação, a focalização isoelétrica em placa de gel de poliacrilamida dessas proteinas enzimáticas sugere que cotilédones de sementes quiescentes de feijão-de-corda Pitiúba possuem quatro isoformas de b-galactosidases |
| Disciplines | Agrociencias, Química |
| Paraules clau: | Leguminosas, Bioquímica, Vigna unguiculata, Cotiledones, Caupí, Enzimas, Semillas, Fisiología vegetal |
| Keyword: | Agricultural sciences, Chemistry, Legumes, Biochemistry, Vigna unguiculata, Cotyledons, Cowpea, Enzymes, Seeds, Plant physiology |
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