| Revista: | Ciencia (Maracaibo) |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000461335 |
| ISSN: | 1315-2076 |
| Autors: | Storaci, Vincenzo1 Kurz, Liliana2 Wilkesman, Jeff1 |
| Institucions: | 1Universidad de Carabobo, Facultad de Ciencias y Tecnología, Valencia, Carabobo. Venezuela 2Universidad de Carabobo, Facultad de Ingeniería, Valencia, Carabobo. Venezuela |
| Any: | 2010 |
| Període: | Ene-Mar |
| Volum: | 18 |
| Número: | 1 |
| Paginació: | 16-25 |
| País: | Venezuela |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental aplicado |
| Resumen en español | La fosfatasa alcalina (AP; EC 3.1.3.1) desfosforila compuestos monofosfatados a pH básico y es usada en estuches comerciales para el diagnóstico de enfermedades hepáticas, intestina - les, óseas y endocrinas (hiperparatiroidismo). Una actividad AP excretada al medio de cultivo por Bacillus stearothermophilus fue aislada, identificada, purificada parcialmente y caracteri - zada. Las bacterias fueron inoculadas en medio líquido con triptona, extracto de levadura, ade- nosin-5-monofosfato y tampón glicina de sodio pH 10 a 55°C. La actividad AP obtenida de un filtrado libre de células luego de 120 h de cultivo, fue ensayada con 2 mM p -nitrofenilfosfato en 50 mM tampón glicina de sodio, pH 10 y 1,5 mM MgCl 2 . A los 20 min de incubación, la reacción fue detenida con 0,2 M NaOH y se cuantificó la liberación de p -nitrofenol a 410 nm. La AP fue pu- rificada parcialmente por DEAE-celulosa, con una actividad específica de 0,3 μmol·min –1 ·mg. La actividad fue máxima a 60°C y pH 10, aunque se registró actividad hasta 80°C. La actividad AP fue estimulada por 1 mM MgCl 2 e inhibida por 0,1 mM ZnCl 2 , 0,1 mM EDTA y 10 mM fosfato inorgánico. Se determinó un peso molecular ( PM ) de ~90 kDa mediante zimografía. Los resulta- dos indican que la enzima aislada pudiera ser relevante en aplicaciones industriales, clínicas y biotecnológicas, por su resistencia térmica y alcalina |
| Resumen en inglés | Alkaline phosphatase (AP; EC 3.1.3.1) dephosphorylates monophosphated compounds at basic pH and is used in several commercial kits for the diagnosis of diseases related with liver, intestines, bones and hyperparathyroidism. The goal of this research was to isolate and par - tially characterize an AP activity secreted to the culture medium by the thermophilic bacteria Bacillus stearothermophilus . Venezuelan thermophiles were inoculated in liquid medium con - taining tryptone, yeast extract, adenosine-5-monophosphate and glycine buffer pH 10 at 55°C. AP activity obtained after 120 h growth was assayed with 2 mM p -nitrophenylphosphate in 50 mM sodium glycine buffer, pH 10 and 1.5 mM MgCl 2 . Hydrolysis reaction was stopped with 0.2 M NaOH after 20 min incubation and the released p -nitrophenol was quantified at 410 nm. AP was partially purified by DEAE-cellulose, with a specific activity of 0.3 μmol·min –1 per mg of protein. Enzymatic activity was maximal at 60°C and pH 10, though activity was detected up to 80°C. AP activity was stimulated by 1 mM MgCl 2 , but inhibited by 0.1 mM ZnCl 2 , 0.1 mM EDTA and 10 mM inorganic phosphate. A molecular weight of ~90 kDa was determined by zymogra - phy. These results indicate this enzyme might have major industrial, clinical and biotechno - logical roles due to its thermal and alkaline resistance |
| Disciplines | Química |
| Paraules clau: | Bioquímica, Actividad enzimática, Bacillus stearothermophilus, Caracterización bioquímica, Electroforesis, Enzimas, Fosfatasa alcalina |
| Keyword: | Biochemistry, Alkaline phosphatase, Bacillus stearothermophilus, Biochemical characterization, Electrophoresis, Enzyme activity, Enzymes |
| Text complet: | https://produccioncientificaluz.org/index.php/ciencia/article/view/9962/9949 |
