| Revista: | Brazilian journal of microbiology |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000291158 |
| ISSN: | 1517-8382 |
| Autors: | Freschi, Carla Roberta1 Carvalho, Luiz Fernando de Oliveira e Silva Oliveira, Celso Jose Bruno de |
| Institucions: | 1Universidade Estadual Paulista "Julio de Mesquita Filho", Faculdade de Ciencias Agrarias e Veterinarias, Sao Paulo. Brasil |
| Any: | 2005 |
| Període: | Oct-Dic |
| Volum: | 36 |
| Número: | 4 |
| Paginació: | 363-367 |
| País: | Brasil |
| Idioma: | Inglés |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental |
| Resumen en inglés | The aim of this study was to compare different DNA-extraction methods and selective enrichment broths for their effectiveness to detect Salmonella typhimurium in artificially inoculated swine feces samples (100 CFU/g) by polymerase chain reaction. After enrichment in Rappaport-Vassiliadis, selenite cystine or Müller-Kauffmann tetrathionate, aliquots were used for DNA extraction by three different methods: boiling-centrifugation, phenol-chloroform and salting-out. Aliquots of extracted DNA were then used as template in PCR. The selective enrichment broths had no effect on the efficiency of PCR when boiling-centrifugation and salting-out were used. On the other hand, phenol-chloroform was superior (P<0.05) when combined to Rappaport-Vassiliadis. Considering cost and efficiency parameters, we encourage the use of Müller-Kauffmann tetrathionate broth in combination with boiling-centrifugation DNA-extraction procedure |
| Resumen en portugués | O objetivo do presente estudo foi comparar diferentes técnicas de extração de DNA, realizadas a partir de três diferentes caldos de enriquecimento seletivo, na sua eficiência em detectar Salmonella Typhimurium em amostras de fezes suínas artificialmente inoculadas (100 UFC/g), pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Após enriquecimento em Rappaport-Vassiliadis, selenito-cistina e tetrationato Müller-Kauffmann, alíquotas destes caldos foram utilizadas para extração do DNA, empregando três métodos diferentes, (a) fervura-centrifugação, (b) fenol-clorofórmio e (c) precipitação por sal. A eficiência dos métodos de extração de DNA por fervura-centrifugação e precipitação por sal foi a mesma, independentemente do caldo de enriquecimento seletivo utilizado. O caldo Rappaport-Vassiliadis apresentou maior eficiência (P<0,05) quando foi empregada a extração de DNA pelo método fenol-clorofórmio. Considerados os parâmetros custo e eficiência, os resultados do estudo indicaram que a partir de amostras fecais suínas a utilização do caldo tetrationato Müller-Kauffmann combinado a técnica de extração do DNA por fervura-centrifugação devam representar a melhor opção, relativamente às demais técnicas testadas |
| Disciplines | Medicina veterinaria y zootecnia |
| Paraules clau: | Porcinos, Parasitología, ADN, Salmonella typhimurium, PCR, Diagnóstico, Heces |
| Keyword: | Veterinary medicine and animal husbandry, Swine, Parasitology, Salmonella typhimurium, Diagnosis, DNA, Feces, PCR |
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