| Revista: | Biotecnología aplicada |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000349594 |
| ISSN: | 0864-4551 |
| Autors: | Hernández, Abel1 González, Annabel2 López, Alina1 Rosalbal, Yamilka1 Ceballo, Yanaysi1 Soto, Jeny1 Enríquez, Gil1 |
| Institucions: | 1Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, Laboratorio de Biorreactores, La Habana. Cuba 2Laboratorios Biológicos Farmacéuticos, Departamento de Virología, La Habana. Cuba |
| Any: | 2012 |
| Volum: | 29 |
| Número: | 2 |
| Paginació: | 102-107 |
| País: | Cuba |
| Idioma: | Inglés |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, aplicado |
| Resumen en español | Para detectar las proteínas del virus de la hepatitis A en sistemas recombinantes se requiere de anticuerpos de calidad. Siguiendo estos objetivos la secuencia de ADNc que codifica para dos proteínas estructurales del virus de la hepatitis A, VP2 y VP3 se clonaron en el vector de expresión en Escherichia coli pTrc His resultando los plásmidos pTrcHisVP2 y pTrcHisVP3. Las células recombinantes portadoras de ambas construcciones fueron crecidas en medio líquido y después de la inducción con IPTG se detectaron ambas proteínas de 34 kDa y 24 kDa mediante SDS-PAGE. Las proteínas recombinantes VP2 y VP3 que contenían el tallo de histidina fueron purificadas en condiciones desnaturalizantes mediante cromatografía de afinidad a iones metálicos rindiendo 8 y 10 mg por 300 mL de cultivo respectivamente. La inmunización de conejos con las proteínas purificadas permitió la obtención de anticuerpos policlonales que permitieron la detección de las proteínas estructurales del virus de la hepatitis A en ensayos de western blot. De acuerdo a estos resultados los antisueros obtenidos pudieran ser útiles en el seguimiento en la producción de proteínas del virus de la hepatitis A en plantas transgénicas, donde una posible expresión de las proteínas del VHA superiores al 0.25% de las proteínas totales solubles podrían ser detectadas con estos sueros policlonales mediante ensayos de western blot |
| Resumen en inglés | In recombinant systems, the availability of good quality antibodies is required to detect Hepatitis A virus (HAV) proteins. Following this line, the cDNA sequences coding for two hepatitis A virus structural proteins, VP2 and VP3, were cloned into the bacterial expression vector pTrcHis yielding plasmids pTrcVP2 and pTrcVP3. Recombinant Escherichia coli XL1-blue strains harboring these two constructs were grown in liquid media and after IPTG gene induction, both fused recombinants molecules were detected by SDS-PAGE as 34 kDa and 24 kDa bands respectively. Recombinant VP2 and VP3 proteins containing N-terminal hexa-histidine tags were purified under denaturing conditions by immobilized metal affinity chromatography yielding 8 mg and 10 mg of refolded protein per 300 mL of bacterial culture respectively. Immunization of rabbits against purified recombinant proteins allowed the production of high titer polyclonal sera with immunological reactivity detecting hepatitis A virus proteins using western-blot analysis. According to our results, these two polyclonal sera constitute a valuable tool to follow the production of HAV proteins in transgenic plants, where a putative expression of HAV proteins higher than 0.25% of the total soluble protein could be detected with the use of these sera by western blot assay |
| Disciplines | Biología, Medicina |
| Paraules clau: | Inmunología, Virus de la hepatitis A, Anticuerpos policlonales, Estructura protéica |
| Keyword: | Biology, Medicine, Immunology, Hepatitis A virus, Polyclonal antibodies, Protein structure |
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