| Revista: | Acta biológica colombiana |
| Base de datos: | PERIÓDICA |
| Número de sistema: | 000388079 |
| ISSN: | 0120-548X |
| Autors: | Ruiz Sáenz, Julián1 Osorio, Jorge Emilio2 Vera, Victor Julio1 |
| Institucions: | 1Universidad Nacional de Colombia, Bogotá. Colombia 2University of Wisconsin, School of Veterinary Medicine, Eau Claire, Wisconsin. Estados Unidos de América |
| Any: | 2012 |
| Volum: | 17 |
| Número: | 3 |
| Paginació: | 511-524 |
| País: | Colombia |
| Idioma: | Español |
| Tipo de documento: | Artículo |
| Enfoque: | Experimental, analítico |
| Resumen en español | El herpesvirus bovino-1 (BHV-1) es un virus de genoma DNA perteneciente a la familia Herpesviridae, el cual afecta al bovino en el que provoca un amplio espectro de manifestaciones clínicas y pérdidas económicas. El principal componente inmunogénico de su envoltura es la glicoproteína D (gD), la cual ha sido caracterizada y utilizada como inmunógeno en distintossistemas de expresión. El objetivo de este trabajo fue generar un poxvirusrecombinante (Raccoonpox[RCN]) que expresara una versión truncada de la gD del BHV-1 para ser usado como inmunógeno. Para ello, se amplificó el gen que codifica para la versión truncada de la gD, la cual se clonó en el plásmido de transferencia pTK/ IRES/tpa que posee sitios de homología a la timidinakinasa del poxvirus, un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) y una señal secretoria (tPA), generando el constructo pTK/gD/IRES/tpa. Para generar el RCN recombinante, se tomaron células BSC-1, se infectaron con una cepa Silvestre del RCN (CDC/V71-I-85A) a un índice de multiplicidad de infección de 0,05 y se transfectaron con el constructo pTK/gD/IRES/tpa; generándose diferentes poblaciones virales con y sin el gen de interés. Para seleccionar los virus recombinantes que expresaban el gen de interés,se realizó una selección de recombinantes negativos para timidina kinasa y positivos para la gD por tres rondas de purificación de placas en monocapas de células RAT-2 las cuales son mutantes para timidina kinasa y en presencia de bromodeoxiuridina. Los virus recombinantes se confirmaron por PCR y secuenciación de nucleótidos y se denominaron RCN-gD |
| Resumen en inglés | Bovine Herpesvirus-1 is a DNA virus belonging to the family Herpesviridae, which affects cattle, causing a wide spectrum of clinical manifestations and economic losses. The main immunogenic component is its envelope glycoprotein D (gD), which has been characterized and used as immunogen in different expression systems. The aim of this work wasto generate a recombinant poxvirus(Raccoonpox[RCN]) expressing a truncated version of BHV-1 gD to be used as a vaccine. To do this, it was amplified the gene for a truncated version of gD which subsequently was cloned in transfer plasmid PTK/IRES/tpa which has homology to sites of poxvirus thymidine kinase, an internal site of ribosome entry (IRES) and a secretory signal (tPA), generating the construct PTK/gD/IRES/tpa. To generate the recombinant RCN, we took BSC-1 cells and we infected with a wild type RCN (CDC/V71-I-85A) at a multiplicity of infection of 0.05, then cells were transfected with the construct PTK/gD/IRES/tpa, generating different viral populations with and without the gene of interest. To select recombinant viruses expressing the gene of interest, we performed a selection of recombinant thymidine kinase negative and positive for gD by three rounds of plaque purification on RAT-2 cells monolayers which are thymidine kinase null and using bromodeoxyuridine. Recombinant viruses were recovered and confirmed by PCR and nucleotide sequencing and so called RCN-gD |
| Disciplines | Biología, Medicina |
| Paraules clau: | Virus, Bovinos, Poxvirus, Glicoproteínas, Herpesvirus bovino-1, Clonación molecular, Rinotraqueitis, Vacunas, Vectores genéticos |
| Keyword: | Biology, Medicine, Virus, Bovines, Poxvirus, Glycoproteins, Bovine herpesvirus-1, Molecular cloning, Rhinotracheitis, Genetic vectors, Vaccines |
| Text complet: | Texto completo (Ver PDF) |
