Desarrollo y validación de un inmunoensayo para la detección de la leptina caprina
Document title: Desarrollo y validación de un inmunoensayo para la detección de la leptina caprina
Journal: Archivos de medicina veterinaria (Valdivia)
Database: PERIÓDICA
System number: 000389165
ISSN: 0301-732X
Authors: 1
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Institutions: 1Universidad Nacional Autónoma de México, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, México, Distrito Federal. México
2Universidad Nacional Autónoma de México, Instituto de Investigaciones Biomédicas, México, Distrito Federal. México
3Universidad Nacional Autónoma de México, Centro de Enseñanza Investigación y Extensión en Producción Animal del Altiplano, Tequisquiapan, Querétaro. México
Year:
Volumen: 47
Number: 3
Pages: 311-316
Country: Chile
Language: Español
Document type: Artículo
Approach: Aplicado, descriptivo
Spanish abstract La leptina es una hormona proteica sintetizada y secretada por los adipocitos blancos, que controla varios procesos metabólicos, balance energético, fertilidad, inflamación y angiogénesis. Este estudio muestra el desarrollo y validación de un sistema de inmunodiagnóstico (ELISA) usando la leptina de cabra recombinante generada en Escherichia coli, a partir de esta se generó su correspondiente anticuerpo policlonal en conejos. Previo al desarrollo del sistema se demostró por inmunohistoquímica la capacidad de unión de la leptina recombinante específica a su receptor en el sistema nervioso central. Adicionalmente, el antígeno y el anticuerpo generados se evaluaron en un sistema normalizado de RIA comercial. Para validar el ELISA se comparó las concentraciones plasmáticas de leptina obtenidas con el ELISA en estudio y con un RIA para rumiantes. La curva de desplazamiento de la leptina recombinante no mostró diferencia en su pendiente ni en el coeficiente de correlación con la leptina de referencia, aunque la dosis IC50 fue menor. Se demostró la capacidad de unión de la proteína recombinante a receptores específicos del hipotálamo caprino. No hubo diferencias significativas en las concentraciones plasmáticas de leptina obtenidas por el ELISA en estudio y aquellas obtenidas utilizando el RIA formulado para rumiantes. Los resultados sugieren que el ELISA desarrollado podría ser un método eficaz para determinar la concentración de leptina en suero de cabra
English abstract Leptin is a protein hormone synthesised and secreted by white adipocytes. This hormone is involved in various metabolic processes, energy balance, fertility, inflammation and angiogenesis. In order to have a system for determining the concentration of leptin in goats, in this work we developed and validated an immunodiagnostic system (ELISA) using goat leptin obtained in recombinant form in Escherichia coli. Polyclonal antibodies were prepared in rabbits and a specific ELISA system was developed, then the binding capacity of the recombinant leptin specific to the receptor in the central nervous system was demonstrated by immunohistochemistry. Prior to the development of immunometric system, reagents were evaluated in a commercial RIA standardised system, and results indicated support for the evaluation system. The displacement curve of recombinant leptin showed no difference in the slope or the correlation coefficient with reference leptin, although the IC50 dose was lower. Binding capacity of the recombinant protein to specific receptors in the hypothalamus was identified. No significant differences in plasma concentrations of leptin obtained by ELISA and those obtained in the study using the RIA formulated for ruminants were obtained. These observations suggest that the developed ELISA could be an effective method for determining the concentration of goat serum leptin
Disciplines: Medicina veterinaria y zootecnia
Keyword: Ovinos y caprinos,
Inmunología,
Cabras,
Leptina,
Pruebas inmunológicas,
ELISA
Keyword: Veterinary medicine and animal husbandry,
Sheep and goats,
Immunology,
Goats,
Leptin,
Immunological tests,
ELISA
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