| Journal: | Jornal brasileiro de patologia e medicina laboratorial |
| Database: | PERIÓDICA |
| System number: | 000297347 |
| ISSN: | 1676-2444 |
| Authors: | Ihlaseh, Shadia Muhammad1 Oliveira, Maria Luiza Cotrim Sartor de Silva, Glenda Nicioli da Franchi, Carla Adriene da Silva Camargo, Joao Lauro Viana de |
| Institutions: | 1Universidade Estadual Paulista "Julio de Mesquita Filho", Faculdade de Medicina, Botucatu, Sao Paulo. Brasil |
| Year: | 2007 |
| Season: | Feb |
| Volumen: | 43 |
| Number: | 1 |
| Pages: | 61-67 |
| Country: | Brasil |
| Language: | Portugués |
| Document type: | Artículo |
| Approach: | Experimental, analítico |
| English abstract | BACKGORUND: Laser-capture micro-dissection (LCM) is a recently developed procedure that provides single cells or specific cell groups for molecular analysis. Currently, there are few LCM systems in Brazil, in such a way that it is necessary to disseminate the technical procedures inherent to the methodology, and also to characterize its enormous potential for diagnosis and research. OBJECTIVE: This study describes the standardization of LCM and DNA extraction from formalin fixed and paraffin-embedded tissues. MATERIAL AND METHOD: The gene TP53 exon 8 and the cyclophilin gene were studied in normal and neoplastic liver and kidney samples from a chemical carcinogenesis model in rat. DNA extraction was confirmed by nested-PCR. RESULTS: Histological sections preparation for LCM and the nested-PCR procedures were standardized; 48.3% amplifications of the gene TP53 exon 8 and 51.7% of the cyclophilin gene samples were obtained. When at least one of the gene segments was considered, 79.3% samples presented amplification. DISCUSSION AND CONCLUSION: Procedures for DNA extraction from formalin fixed and paraffin-embedded tissues collected by LCM were standardized. They can be useful for DNA collection for molecular studies |
| Portuguese abstract | INTRODUÇÃO: Microdissecção e captura a laser (MCL) é uma técnica de desenvolvimento recente que permite a coleta de células individuais ou pequeno conjunto de células para análise molecular. Atualmente, no Brasil, há raros microscópios para MCL, de modo que a divulgação dos procedimentos inerentes a essa técnica é oportuna para destacar seu amplo potencial para diagnóstico e investigação. OBJETIVO: Este trabalho descreve a padronização dos procedimentos de MCL e de extração de DNA de material fixado em formalina e incluído em parafina. MATERIAL E MÉTODOS: Foram estudados o éxon 8 do gene TP53 e o gene da ciclofilina em amostras de tecido normal e de neoplasias de fígado e rim provenientes de modelo de carcinogênese química induzida em rato. A extração do DNA foi comprovada por reação em cadeia da polimerase (nested-PCR). RESULTADOS: Foram padronizados os procedimentos de preparo dos cortes histológicos, de microdissecção e captura a laser e de obtenção de seqüências gênicas pela reação de nested-PCR para tecidos incluídos em parafina. Obtivemos amplificação de 48,3% das amostras para o éxon 8 do gene TP53 e 51,7% para o gene da ciclofilina. Considerando pelo menos um dos dois segmentos gênicos, foram amplificadas 79,3% das amostras. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: A extração de DNA de tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina e a técnica de nested-PCR foram adequadamente padronizadas para produtos gênicos de interesse, obtidos de material coletado por MCL. Esses procedimentos podem ser úteis para a obtenção de seqüências de DNA de arquivos para análise molecular |
| Disciplines: | Medicina |
| Keyword: | Diagnóstico, Anatomía e histología, Genética, Gene TP53, ADN, Extracción, Reacción en cadena de la polimerasa (PCR), Láser, Gen de la ciclofilina, Tejidos, Parafina |
| Keyword: | Medicine, Diagnosis, Gene TP53, DNA, Extraction, Polymerase chain reaction (PCR), LASER, Cyclophilin gene, Tissues, Paraffin, Anatomy and histology, Genetics |
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