| Journal: | Biotecnología aplicada |
| Database: | PERIÓDICA |
| System number: | 000349592 |
| ISSN: | 0864-4551 |
| Authors: | Alonso, Mabel1 Támbara, Yanet2 López, Matilde1 Aguilar, Julio C3 Mayo, Orestes4 Prieto, Enrique5 Cremata, José2 Gerwig, Gerrit6 Kamerling, Hans6 Hardy, Eugenio7 |
| Institutions: | 1Utrecht University, Bijvoet Center for Biomolecular Research, Utrecht. Países Bajos |
| Year: | 2012 |
| Volumen: | 29 |
| Number: | 2 |
| Pages: | 87-101 |
| Country: | Cuba |
| Language: | Inglés |
| Document type: | Artículo |
| Approach: | Experimental, aplicado |
| Spanish abstract | Se obtuvo el acemanano de Aloe barbadensis mediante cuatro procesos: 1) cromatografía de exclusión molecular (SEC) en matriz de sefarosa CL-4B, seguida de precipitación etanólica; 2) SEC, ultrafiltración en cartuchos de fibra hueca (30 kDa o 0.1 μm) y precipitación etanólica; 3) SEC, precipitación con bromuro de cetil trimetil amonio (CTAB) y precipitación etanólica; y 4) precipitación directa con CTAB, seguida de precipitación etanólica. El CTAB fue efectivo para concentrar los eluatos cromatográficos (proceso 3) y permitió el aislamiento directo y la purificación del acemanano a partir de extractos etanólicos crudos (proceso 4), sin recurrir a SEC. En el proceso 4 disminuyeron los tiempos de operación del proceso (a 9 de 15 días del proceso 3), y los costos por materias primas. Ambos procesos generaron acemanano libre de niveles detectables de antraquinonas y ADN contaminante, con niveles de proteína inferiores al 5% del peso seco. El preparado estuvo compuesto fundamentalmente de manosa, 97% en los procesos 1 al 3, y 75% en el proceso 4, con masas moleculares en el rango de 2000-5000 Mr, según SEC en G5000 PW. El acemanano en su formulación seca se esterilizó mediante radiación gamma a la dosis óptima de 10 kGy y retuvo sus propiedades físico-químicas y su capacidad adyuvante, demostrada esta última mediante coadministración con el HBsAg por vía nasal en ratones. La mezcla acemanano-benzil alcohol 1% (p/v) no afectó la capacidad adyuvante. El contenido de carbohidratos totales, las propiedades organolépticas y el perfil SEC-HPLC, el pH y el límite microbiano se mantuvieron estables por al menos 6 meses de almacenamiento a -20 °C. Estos resultados pueden ser utiles para el diseño de procesos de producción de acemanano con calidad farmacéutica para estudios clínicos |
| English abstract | Acemannan from Aloe barbadensis was obtained with four processes: 1) size exclusion chromatography (SEC) using Sepharose CL-4B matrix followed by ethanolic precipitation; 2) SEC, ultrafiltration using hollow-fiber cartridges (30 kDa or 0.1 μm) and ethanolic precipitation; 3) SEC, precipitation with cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) and ethanolic precipitation; and 4) direct precipitation with CTAB and ethanolic precipitation. The detergent CTAB was effective to concentrate chromatographic eluates (process 3) and allowed the direct isolation and purification of acemannan from crude ethanolic extracts (process 4), without recurring to SEC. Process 4 also decreases operation time (9 days vs 15 days in process 3), and costs regarding raw materials. Both processes generate materials devoid of detectable levels of anthraquinones and contaminating DNA, and proteins below 5% of dry weight. This material was essentially made of mannose; 97% obtained in processes 1-3 and 75% in process 4, with a molecular mass ranging from 2000 to 5000 Mr according to G5000 PW SEC. Acemannan in dry form was sterilized at the optimal 10 kGy γ-radiation dose, and retained both its physical-chemical properties and adjuvanticity for HBsAg co-delivered by the nasal route in mice. The mixture of acemannan-1% benzyl alcohol (w/v) does not affect the adjuvanticity. The total carbohydrates content, SEC-HPLC, pH, microbial limit and organoleptic characteristics of the irradiated polysaccharide suspended in phosphate buffer remained stable at -20 ºC for at least 6 months of storage. These results may be useful for designing processes for producing pharmaceutical quality acemannan to be used in vaccine clinical studies |
| Disciplines: | Química |
| Keyword: | Fitoquímica, Aislamiento químico, Acemanano, Aloe barbadensis, Liliaceae |
| Keyword: | Chemistry, Phytochemistry, Chemical isolation, Acemannan, Aloe barbadensis, Liliaceae |
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