| Journal: | Biotecnología aplicada |
| Database: | PERIÓDICA |
| System number: | 000348702 |
| ISSN: | 0864-4551 |
| Authors: | Leyva, Alberto1 Sánchez, Julio C1 López, Lissette1 Font, Milagros1 González, Tatiana1 Pérez, Bárbara1 Hernández, Neyda1 Martínez, Yamila1 Pereira, Annette1 Rodríguez, Ivonne1 |
| Institutions: | 1Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, La Habana. Cuba |
| Year: | 2011 |
| Volumen: | 28 |
| Number: | 4 |
| Pages: | 221-227 |
| Country: | Cuba |
| Language: | Español |
| Document type: | Artículo |
| Approach: | Experimental, aplicado |
| Spanish abstract | Se desarrolló y validó un ensayo inmunoenzimático en fase sólida (ELISA) de tipo sándwich para la cuantificación del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (VHB), obtenido por vía recombinante de la levadura metilotrófica de Pichia pastoris. La cuantificación se efectuó con el anticuerpo monoclonal (AcM) CB.Hep-1, utilizado como inmunoligando para su purificación. Los estudios de validación siguieron la guía ICH Q2 (R1) y la regulación No. 41, de 2007 del Cecmed. Se cuantificaron hasta 11.9 ng/mL, y se analizaron los parámetros de linealidad, especificidad, precisión y exactitud. El AcM CB.Hep-1, usado como recubrimiento y conjugado en el ELISA, fue específico en el reconocimiento del antígeno de superficie del VHB (AgsHB) recombinante, por lo que la cuantificación fue exacta. En el análisis de varianza para el ensayo de interferencia, el valor de probabilidad para cada tampón de las muestras del proceso de producción fue mayor que 0.1, para un nivel de confianza de 99%. La variabilidad intraensayo fue entre 0.77 y 7.47%, e interensayo fue entre 1.19 y 19.41%. Para cada muestra fue menor del 10 y el 20%, respectivamente. Se obtuvo un recobrado entre 98.18 y 100.31%, con un coeficiente de variación por debajo del 20%. El ELISA es específico para este anticuerpo monoclonal en el rango de concentraciones estudiadas. La curva de calibración es lineal entre 191.7 y 11.9 ng/mL. Por su precisión, especificidad y exactitud, este ELISA se convierte en una poderosa herramienta en el control del proceso de la vacuna recombinante contra el VHB |
| English abstract | The present work describes the development and validation of a sandwich-type enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for quantifying the surface antigen of hepatitis B virus (HBsAg), obtained from a recombinant strain of the methylotrophic yeast Pichia pastoris. It is based on monoclonal antibody CB.Hep-1, normally employed as a ligand for the purification of HBsAg. Validation followed the guidelines of ICH Q2 and CECMED regulation No. 41 from 2007. Parameters such as linear working range, specificity, precision and accuracy were analyzed. The assay has a lower quantification limit of 11.9 ng/mL. Monoclonal antibody CB.Hep-1, used both for coating and as a conjugate during the ELISA, specifically bound recombinant HBsAg with excellent accuracy. An analysis of variance for the interference study yielded a probability, for each process control sample type/buffer combination, higher than 0.1, for a confidence level of 99%. Intra-assay variability ranged from 0.77 to 7.47%, and inter-assay variability ranged from 1.19 to 19.41%., always staying, for each sample, below 10 and 20% respectively. Recovery ranged from 98.18 to 100.31%, with a variation coefficient under 20%. The ELISA is specific for this monoclonal antibody within the range of studied concentrations, and has a linear response for antigen concentrations from 191.7 to 11.9 ng/mL. Given its precision, specificity and accuracy, this ELISA is a powerful tool for process control during the production of the recombinant vaccine against HBV |
| Disciplines: | Medicina |
| Keyword: | Inmunología, Pruebas de validación, ELISA, Antígenos de superficie, Hepatitis B, Anticuerpos monoclonales |
| Keyword: | Medicine, Immunology, Validation tests, Surface antigens, ELISA, Hepatitis B, Monoclonal antibodies |
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